支原体巨噬细胞活化脂肽-2经MAPKs途径诱导THP-1细胞表达MMP-9

发布时间：2017-10-06 07:45

  本文关键词：支原体巨噬细胞活化脂肽-2经MAPKs途径诱导THP-1细胞表达MMP-9

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【摘要】：支原体感染机体后主要通过单核、巨噬细胞清除病原体。其中单核细胞以阿米巴样运动穿过血管内皮细胞,随后突破血管基底层和结缔组织到达感染部位是发挥免疫应答的重要步骤。在此过程中,基质金属蛋白酶(MMPs)能通过降解细胞外基质,从而参与炎症反应以及血管生成等多种生物学效应,因而发挥着关键作用。临床研究和动物实验表明,支原体感染后,患者血清或大鼠羊水中MMP-9含量显著增高,这表明MMP-9也参与了支原体感染后的炎症反应。为了进一步了解支原体感染对MMP-9分泌的影响,本研究从以下几方面进行体外研究:(1)培养人单核细胞系THP-1细胞,分别用0.1、1.0和5.0μg/mL的支原体巨噬细胞活化脂肽-2(MALP-2)刺激不同时间,用ELISA和Western blot分别检测细胞培养上清中MMP-9的含量以及金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的表达;实时定量PCR观察MMP-9以及TIMP-1 mRNA的表达水平;比色法分析MMP-9活性的变化。(2)THP-1细胞预先与丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂孵育30min,随后用5μg/mL MALP-2刺激18h,ELISA观察其对MMP-9分泌的影响。结果显示:THP-1细胞基础状态下MMP-9和TIMP-1表达水平较低。当分别给予0.1、1.0和5.0μg/mL MALP-2作用18h后,可诱导THP-1细胞分泌MMP-9和表达TIMP-1,且随着MALP-2浓度的增加,MMP-9的产生以及TIMP-1表达水平相应增加,但TIMP-1的增幅低于MMP-9;实时定量PCR的结果表明:不同浓度的MALP-2处理THP-1细胞16h后,也可上调细胞内MMP-9和TIMP-1 mRNA的表达水平,但MMP-9 mRNA增高更显著。同时MALP-2处理也可增加细胞培养上清中MMP-9的酶活性。此外,MALP-2作用THP-1细胞6h后即可上调MMP-9 mRNA表达,随着时间的延长,mRNA表达水平逐渐增高,16h后达到峰值,并持续高表达至36h。THP-1细胞分别与30μmol/L SB203580(p38抑制剂)、SP600125(JNK抑制剂)和PD98059(ERK抑制剂)预处理后,可显著抑制MALP-2对MMP-9的诱生作用。以上结果表明支原体MALP-2能经MAPKs途径诱导THP-1细胞表达MMP-9。
【关键词】：支原体巨噬细胞活化脂肽-2 基质金属蛋白酶-9 金属蛋白酶组织抑制因子-1 丝裂原活化蛋白激酶
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R518.9
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 第1章 绪论10-14
• 第2章 材料和方法14-26
• 第3章 实验结果26-30
• 第4章 讨论30-34
• 第5章 结论34-36
• 参考文献36-40
• 文献综述 呼吸系统疾病的炎症信号通路研究进展40-52
• 参考文献47-52
• 附录52-54
• 科研成果54-55
• 资助基金55-56
• 致谢56

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本文编号：981595