产γ-氨基丁酸益生菌的筛选及对小鼠微生态效应的影响研究

发布时间：2017-10-13 11:36

  本文关键词：产γ-氨基丁酸益生菌的筛选及对小鼠微生态效应的影响研究

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【摘要】：本研究为筛选具有生物拮抗活性和耐酸耐胆盐能力的高产γ-氨基丁酸(GABA)的益生菌菌株,并探讨其微生态效应。从待分离样品中筛选出可疑菌株,经纸层析和HPLC-MS进行定性和定量分析,筛选出一株高产GABA菌株；通过小鼠饲喂试验研究该高产GABA菌株对小鼠生长性能、血清抗氧化能力、免疫器官指数、脾淋巴细胞增殖、盲肠菌群以及空肠和十二指肠黏膜的影响。试验结果如下：1.通过细菌形态、生理生化特性并结合细菌16S rDNA序列分析对高产菌株进行鉴定,同时研究高产菌株对3种动物性病原菌的生物拮抗作用及其耐酸耐胆盐试验。结果,从泡菜中筛选出的菌株GA8为高产γ-氨基丁酸菌株,在含有1%L-谷氨酸钠的GYP培养基中37℃培养48 h,产GABA量达3.50 g-L-’,经鉴定该菌株为植物乳杆菌；该菌株全菌液和上清液对鸡源大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和鸡白痢沙门氏菌有一定的抑制作用,其菌体悬液无抑菌能力；该菌初始活菌数为108 CFU.mL-1时,在pH=2.0的酸性环境中处理4 h后活菌数能达到106CFU.mL-1以上；0.3%胆盐浓度处理4 h,活菌数达到103 CFU·mL-1左右。表明所筛选出的产γ-氨基丁酸菌株GA8具有一定的抑菌性能和耐酸能力,0.1%胆盐浓度下有较强的存活率。2.60只昆明系雌性小鼠随机分成5组,试验1、2、3组小鼠饮用水中分别添加含有1×106 CFU mL-1,2×106 CFU mL-1,4×106 CFU mL-1的产GABA植物乳杆菌GA8,对照组在饮用水和日粮中不添加任何制剂,GABA组在日粮中加入15 ppmGABA,小鼠饲喂30 d后,检测其生长性能、血清抗氧化能力、免疫器官指数、脾淋巴细胞增殖、盲肠菌群结构以及空肠和十二指肠黏膜结构。结果：(1)饲喂产GABA植物乳杆菌GA8后,试验1、2、3组、GABA组的末重分别比对照组提高了2.10%、0.86%、5.55%、4.48%,平均日增重分别提高了10.71%、7.14%、17.86%、10.71%,其中仅试验3组与对照组差异显著(P0.05)；试验1、2、3组、GABA组的料重比分别比对照组降低了6.93%、5.66%、11.10%、10.68%(P0.05)。(2)与对照组相比,试验1、2、3组的总抗氧化能力(T-AOC)分别提高了6.04%、30.97%、31.11%,总超氧化物歧化分别提高了4.94%、6.13%、5.23%,丙二醛(MDA)分别降低了11.32%、9.16%、7.63%,但差异均不显著(P0.05)。(3)试验1、2、3组小鼠盲肠大肠杆菌显著或极显著低于对照组和GABA组(P0.05或P0.01)；试验1、2、3组、GABA组的乳杆菌比对照组分别增加了1.16%、0.91%、1.68%、0.52%,试验3组与对照组差异显著(P0.05)；试验1、2组的肠球菌显著低于对照组(P0.05),试验2组显著低于GABA组(P0.05)；采用PCR-DGGE技术分析,试验1、2、3组和GABA组肠道菌群的多样性指数、均匀度和丰富度均高于对照组。(4)试验1、2、3组和GABA组的各免疫器官指数表现出了一定的优势,胸腺指数分别提高了19.25%、6.28%、16.74%、1.26%,试验1组与对照组、GABA组差异均显著(P0.05),其余各组无明显差异；试验1、2、3组和GABA组的脾脏指数分别提高了10.71%、12.01%、10.39%、9.09%,各组间无明显差异(P0.05)。(5)饲喂产GABA植物乳杆菌后小鼠脾淋巴细胞转化率增高,试验1、2、3组与对照组相比差异极显著(P0.01)；GABA组与对照组差异显著(P0.05)；试验1组与试验2组、GABA组差异显著(P0.05);试验3组与GABA组差异极显著(P0.01)。(6)十二指肠绒毛长度明显增加,试验1、2、3组、GABA组都与对照组差异极显著(P0.01),其中试验1组与试验3组差异显著(P0.05),试验3组与试验2组和GABA组差异极显著(P0.01)；十二指肠隐窝深度降低,但差异不明显(P0.05)；试验1、2、3组和GABA组的空肠绒毛长度明显增加,其中试验1组与对照组、试验2组和GABA组差异极显著(P0.01),试验2组与对照组差异显著(P0.05)；空肠隐窝深度明显降低,试验3组与对照组差异极显著(P0.01),试验2组和GABA组与对照组差异显著(P0.05)。
【关键词】：γ-氨基丁酸 益生菌 筛选 生物活性 微生态
【学位授予单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S816
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-9
• 缩略词表9-12
• 第一章 文献综述12-21
• 1 益生菌12-16
• 1.1 定义12
• 1.2 分类12
• 1.3 生理功能12-14
• 1.4 益生菌的作用机制14-15
• 1.5 益生菌的应用15-16
• 2 γ-氨基丁酸16-20
• 2.1 GABA的分子结构及理化性质16-17
• 2.2 GABA的代谢途径17
• 2.3 GABA的安全性评价17-18
• 2.4 GABA的生理功能18-19
• 2.5 GABA的应用19-20
• 2.6 产GABA菌株的应用20
• 3 本研究的目的和意义20-21
• 第二章 产γ-氨基丁酸益生菌菌株的筛选21-29
• 1 材料21-22
• 1.1 待分离样品21
• 1.2 培养基21
• 1.3 主要仪器21-22
• 1.4 主要试剂22
• 2 方法22-24
• 2.1 菌株的分离与纯化22
• 2.2 产GABA菌株的初步筛选22-23
• 2.3 发酵液中GABA的精确定量分析23
• 2.4 产γ-氨基丁酸菌株的初步鉴定23
• 2.5 菌株的16 S rDNA序列分析23-24
• 3 结果24-28
• 3.1 产GABA菌株的初步筛选24-25
• 3.2 HPLC-MS法精确定量25
• 3.3 菌株的初步鉴定25-27
• 3.4 菌株的16S rDNA序列分析27-28
• 4 讨论28-29
• 第三章 产γ-氨基丁酸植物乳杆菌GA8的生物拮抗及耐酸耐胆盐试验29-34
• 1 材料29
• 1.1 菌株29
• 1.2 培养基29
• 2 方法29-30
• 2.1 高产GABA菌株对3株病原菌的生物拮抗试验29-30
• 2.2 菌株的耐酸试验30
• 2.3 菌株的耐胆盐试验30
• 3 结果30-32
• 3.1 菌株GA8对3株病原菌的生物拮抗作用30-31
• 3.2 耐酸试验结果31
• 3.3 菌株GA8耐猪胆盐试验31-32
• 4 讨论32-34
• 第四章 产GABA植物乳酸菌GA8对小鼠的微生态效应的研究34-49
• 1 材料34-35
• 1.1 菌株34
• 1.2 试验动物34
• 1.3 主要仪器34
• 1.4 主要试剂和溶液配制34
• 1.5 动物分组及基础日粮34-35
• 2 方法35-39
• 2.1 对小鼠生长性能的影响35
• 2.2 小鼠抗氧化指标的测定35-36
• 2.3 小鼠免疫器官指数的检测36
• 2.4 小鼠肠道菌群检测36
• 2.5 小鼠脾细胞的增殖试验36
• 2.6 PCR-DGGE分析小鼠肠道菌群多样性36-38
• 2.7 肠道切片的制作及肠绒毛的测定38-39
• 2.9 数据处理与分析39
• 3 结果39-45
• 3.1 对生长性能的影响39-40
• 3.2 对小鼠抗氧化能力的影响40
• 3.3 对小鼠肠道菌群的影响40-41
• 3.4 PCR-DGGE技术分析产GABA植物乳杆菌对小鼠肠道菌群的影响41-43
• 3.5 小鼠免疫器官指数检测结果43-44
• 3.6 产GABA植物乳杆菌对小鼠脾细胞增殖的影响44
• 3.7 产GABA植物乳杆菌对小鼠小肠黏膜发育的影响44-45
• 4 讨论45-49
• 第五章 结论49-50
• 参考文献50-58
• 致谢58-59
• 攻读硕士学位期间发表文章情况59

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前8条

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本文编号：1024666