地衣芽孢杆菌CP-16与嗜麦芽窄食单胞菌10号菌降解角蛋白关键酶研究

发布时间：2018-02-12 04:28

本文关键词： 地衣芽孢杆菌嗜麦芽窄食单胞菌二硫键还原角蛋白　出处：《中国农业科学院》2015年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：羽毛主要为角蛋白,且富含二硫键,较其他类型蛋白质更为稳定。动物消化道内蛋白酶并不能将其水解,限制了羽毛蛋白质在畜禽日粮中的应用。打开二硫键,破坏角蛋白空间结构,是提高其利用率的关键。本实验以高二硫键还原能力角蛋白降解菌地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)CP-16和嗜麦芽窄食单胞菌(S.maltophilia)10号菌为实验材料,旨在获得具有高二硫键还原酶活性的酶蛋白,并对其与角蛋白酶协同作用进行研究,探索生物酶解角蛋白的关键酶。B.licheniformis CP-16降解羽毛关键酶蛋白的分离纯化。在本实验室研究的基础上,利用离子交换层析和分子筛层析分离纯化出了新的羽毛降解关键蛋白酶-寡肽酶。研究发现,其可促进角蛋白酶水解酪蛋白的水解度,其主要在角蛋白水解后期发挥作用。具二硫键还原能力酶蛋白基因的克隆表达。利用生物信息学技术,在Uniprot中搜集到了B.licheniformis和S.maltophilia中有关二硫键还原的五个酶蛋白核酸序列。根据该序列设计引物,以B.licheniformis CP-16和S.maltophilia 10号菌为实验材料成功扩增出目的基因,并在大肠杆菌中成功表达纯化,分别命名为B-P、S-G、S-T、S-P和S-A。具二硫键还原能力重组酶酶学性质及与角蛋白酶水解角蛋白相互关系研究。研究发现,P-Trx(本实验室保存)、B-P、S-G、S-T、S-P和S-A等具有二硫键还原活性的6种酶的最适p H分别为9.0、9.0、6.0、6.0、8.0和8.0,最适酶促反应温度分别为40℃、40℃、55℃、40℃、45℃和55℃。具二硫键还原活性的P-Trx、B-P、S-G、S-T和S-P均可促进P-Ker对羽毛角蛋白的水解,其中P-Trx的促进率最高,为47%。P-Trx、B-P和S-P二硫键还原酶活性均受胰蛋白酶和糜蛋白酶的影响,但对P-Trx的水解作用最小,而糜蛋白酶对B-P的水解作用为100%。同样重组酶P-Trx和S-P对胰蛋白酶和糜蛋白酶也有一定影响,但均不足10%,这3种重组酶均可促进胰蛋白酶和糜蛋白酶对豆粕的水解,其中S-P对胰蛋白酶水解豆粕的促进作用最大,达83%。
[Abstract]:On the basis of the research of this lab , it is found that it can promote the hydrolysis degree of keratin by using ion exchange chromatography and molecular sieve chromatography . The results show that P - Trx , B - P , S - G , S - T , S - P and S - P can promote the hydrolysis of feather keratin . The results show that the promoter of P - Trx , B - P , S - G , S - T and S - P can promote the hydrolysis of keratin .

【学位授予单位】：中国农业科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S816.3

【参考文献】