市售农畜产品中转基因大豆GTS40-3-2相关基因及其产物的检测与SD大鼠毒理学研究

发布时间：2018-02-21 10:54

本文关键词： 农畜产品山西市场检测载体构建抗草甘膦除草剂转基因大豆GTS40-3-2 SD大鼠毒理学　出处：《山西农业大学》2015年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：[目的]转基因作物在全球范围内的广泛种植促进了粮食产量的增加,缓解了人类的贫困和饥饿以及因杀虫剂的使用而带来的环境等问题,为全球特别是发展中国家和地区的经济、环境以及社会福利等方面带来了持续可观的巨大利益。然而,生物安全性问题从转基因作物诞生之日起就与之相伴,其争论从未停止过。尽管,在进行商业化之前转基因作物及其产品已经过了严格的一系列毒理学认证,但目前的转基因作物及其产品的安全性试验大多数仅限于动物短期喂养观察试验,对转基因作物及其产品的长期摄入所带来的慢性影响缺乏相关试验数据,且对人体的影响缺乏有效的论证。本论文从动物饲料转基因成分检测入手,进而针对人们的日常膳食肉、蛋、奶和油进行全面的转基因成分调查研究,最后进行SD大鼠的长期慢性动物饲养,旨在为我国转基因饲料饲用安全性评价体系提供试验数据支持,同时也对来源于转基因作物的原材料产品的合理应用以及通过转基因饲料喂养动物所产生的农畜产品的安全性评价具有重要的现实和理论意义。[方法]采用定性PCR方法检测了30份山西市场上蛋鸡和猪饲料中的转基因成分;应用重叠PCR方法,采用基因的克隆、转化和表达,构建了标准质粒分子;利用构建的标准质粒分子,进行了山西市场上肉、蛋、奶和油等农畜产品中转基因成分定性、定量及ELISA蛋白检测;模拟了转基因抗草甘膦除草剂大豆GTS40-3-2长期喂养大鼠动物模型,采用组织切片、血液学与血液生化学指标、定性和定量及ELISA蛋白检测等方法来探讨转基因大豆成分对大鼠的毒性作用及残留情况。[结果](1)抽检山西市场上饲料共计30份,包括20家不同厂家的鸡和猪不同发育期饲料,品种具有代表性,覆盖面广。其中25个饲料样品检测结果为阳性,阳性占有率为83.3%。而阳性样品中仅有1个饲料样品标明含有“转基因”成分,转基因产品标识率仅为4%。试验结果表明：鸡和猪饲料中大多含有大豆转化体事件GTS40-3-2,有少量饲料含有玉米转化体事件MON810。(2)利用定性PCR和重叠PCR技术,将四个基因成功通过分子克隆的方法克隆到一个质粒载体分子中,在后续的定性和定量PCR检测中用作阳性标准品。(3)对山西市场肉、蛋、奶和油等农畜产品进行转基因生物产品成分相关基因及蛋白检测。在进行动物饲料相关基因检测中发现所有抽查的11家农户所喂养动物的饲料全部含有转基因成分,特别是含有大豆GTS40-3-2特异转化体事件。随后试验收集这11家农户所饲养动物的粪便进行相关基因检测,除了含有真核生物核糖体特异的基因18SrDNA外,都未检测到相关基因。对所抽查的一户农家的10只肉鸡进行了转基因大豆GTS40-3-2在肉鸡体内代谢残留的研究,无论是定性和定量还是蛋白检测,都检测到肉鸡的盲肠内容物和肠粪中含有转基因成分,肉鸡的其它实质脏器未发现含有转基因成分。此外,对山西市场食用油及猪肉、鸡蛋和牛奶进行了相关基因及蛋白检测,发现除了猪的肠内容物含有转基因成分外,其它实质脏器都未检测到转基因成分的相关基因及蛋白。14份食用油检测到有13个油样含不同含量的大豆内标Lectin基因,只有2个油样检测出含有极低拷贝的GTS40-3-2基因。(4)通过添加含有大豆转化体事件GTS40-3-2的豆粕作为饲料喂养一代和二代SD大鼠,试验测定了大鼠的周增重、饲料消耗、血液学指标、血液生化指标以及组织病理切片观察等指标,都未发现转基因组和非转基因组有统计学意义的显著差异。试验对大鼠的肠道菌群以及脏器进行了与饲料相关基因的定性和定量检测以及ELISA蛋白检测,只有大鼠肠粪和盲肠内容物检测到有转基因成分的残留,大鼠的肠道菌群和实质脏器都未检出有转基因成分的残留。[结论]通过定性PCR、实时荧光定量PCR、切片技术和ELISA蛋白检测等方法对山西市场上的动物饲料、猪脏器、肉鸡脏器、鸡蛋、牛奶、食用油和SD大鼠长期喂养进行试验。研究结果揭示：山西市场上的动物饲料中普遍含有转基因成分,但对这些饲料喂养的动物所产生的猪肉、肉鸡、鸡蛋和牛奶等农畜产品进行饲料相关的定性、定量及ELISA检测,均未发现有相关转基因成分和蛋白的残留；食用油的检测结果显示样品含有低拷贝内源基因,少数样品含有极低拷贝的外源基因。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：山西农业大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S816

【参考文献】