鸡PPARγ基因的mRNA 5’端克
发布时间：2018-02-23 00:13
本文关键词： 鸡 脂肪 PPARγ 转录本 蛋白亚型 启动子 甲基化 出处：《东北农业大学》2015年硕士论文 论文类型：学位论文
【摘要】：过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)是核受体超家族成员之一。PPARγ在动物机体中作用广泛,是脂肪细胞分化和脂质代谢网络的关键调控因子,与肥胖症及其相关疾病关系密切。鸡PPARγ基因的结构还不是完全清楚,目前NCBI数据库中只有一条鸡PPARγ基因的转录本,通过5?RACE分析发现鸡PPARγ基因有5个不同的转录本,它们的唯一差异是5?端末端序列不同。开放阅读框(Open reading frame)分析发现,鸡的这5个转录本能编码两个蛋白亚型或蛋白异构体,即c PPARγ1和c PPARγ2蛋白,这两种蛋白的差别仅是它们的N端存在6个氨基酸的差异。实时荧光定量PCR分析了鸡PPARγ基因5个转录本的组织表达模式,结果显示c PPARγ1在脂肪组织,心脏,肝脏,脾脏,肾脏和十二指肠中表达很高,在肺脏,大脑和胰腺中少量表达,而在胸肌和腺胃中表达量极低;与c PPARγ1相比,c PPARγ2,c PPARγ3,c PPARγ4和c PPARγ5在所有组织包括脂肪组织中的表达都相对较低,比较而言,c PPARγ2在脂肪中的表达量相对较高,呈现一定的脂肪组织特异性;c PPARγ3在脂肪组织,肾脏,脾脏和肝脏中表达丰富。c PPARγ4和c PPARγ5在所有组织中表达量都很低,其中cPPARγ5在脂肪组织,心脏,肝脏和肾脏中的表达量丰富;高低脂鸡腹部脂肪组织的表达分析发现,c PPARγ1在2到7周龄高脂鸡脂肪组织中的表达极显著高于低脂鸡(P0.01);而c PPARγ3在3、5周龄和4、6周龄高脂鸡脂肪组织中的表达要显著(P0.05)或极显著高于低脂鸡(P0.01);c PPARγ5在3、4、6周龄的高脂鸡脂肪组织表达极显著高于低脂鸡(P0.01),在2、7周龄的表达水平达到显著(P0.05)。根据鸡的5个转录本序列信息,利用UCSC genome browser分析显示,鸡PPARγ基因有3个不同的启动子(P1、P2及P3),其中P1能启动鸡c PPARγ1的转录,P2能启动鸡c PPARγ2,c PPARγ3和c PPARγ4的转录,P3能启动鸡c PPARγ5的转录。生物信息学的方法分析了鸡P1、P2启动子区2kb的序列,发现P1、P2均含有GC-box元件,其中P1含有有很多的C/EBP家族,NFKPB,AP2等与脂肪分化相关的转录因子结合位点;其中P2也发现一些C/EBP家族,AP2等一些脂肪相关转录因子;截短突变分析发现在P1启动子区域(-577/+109)显示非常强荧光素酶活性(P0.01);同样在在P2启动子区域(-671/+140)显示很强的荧光素酶活性(P0.05);通过生物信息学的方法分析发现鸡P1和P2启动子区分别存在一个大的Cp G岛。利用甲基化酶抑制剂(5′-aza-2′-deoxycytidine)处理DF1细胞和鸡前脂肪细胞,real-time RT-PCR检测分析5个c PPARγ转录本的表达变化,结果发现,甲基化酶抑制剂处理DF1细胞之后,鸡PPARγ的5个转录本都有不同程度的上升,(PPARγ1,PPARγ2,PPARγ3,PPARγ4在24,48,72,96h的表达都呈现上升趋势,其中96h时PPARγ1和PPARγ3表达显著升高(P0.05),PPARγ4达到极显著水平(P0.01);而在前脂肪细胞中发现,与0h相比,前脂肪细胞处理后24,48,72,96h后PPARγ1的表达量持续升高,并在96h时达到显著(P0.05),其他转录本在不同时间点虽然呈现一定的上升趋势,但是表达并没有明显的趋势。使用甲基化转移酶(M.Sss I)处理包含鸡PPARγ基因3个启动子报告基因质粒,报告基因分析发现,与未甲基化的P1,P2和P3启动子相比,甲基化处理后的鸡P1(M)和P2(M)启动子的活性受到极显著的抑制(P0.01),而鸡P3(M)启动子活性受到显著的抑制(P0.05)。说明DNA甲基化可能调控鸡PPARγ基因启动子的活性。本研究是首次发现鸡PPARγ基因有5个不同的转录本,能编码2个蛋白亚型,鸡PPARγ基因有3个不同的启动子。本研究为深入探索鸡c PPARγ的调控机制奠定了坚实基础。
[Abstract]:Peroxisome proliferator activated receptor gamma (PPAR gamma) is one of the members of the nuclear receptor superfamily.PPAR gamma function in animal body, is a key regulator of adipocyte differentiation and lipid metabolic networks, and relationship between obesity and obesity related diseases closely. Chicken PPAR gene structure is not fully understood, the transcripts. The NCBI database is only a chicken PPAR gene by 5? RACE analysis showed that the chicken PPAR gene had 5 different transcripts, the only difference is the 5? End of different sequence. The open reading frame (Open reading frame) analysis showed that the 5 chicken transcription two protein encoding instinct type or protein isomer, namely C PPAR and C PPAR gamma 1 gamma 2 protein, the only difference between the two proteins is the difference in their N end of 6 amino acids. The real-time quantitative PCR analysis of chicken PPAR gene 5 transcript expression patterns,. 鏋滄樉绀篶 PPAR纬1鍦ㄨ剛鑲粍缁，
本文编号：1525662
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