解脂耶氏酵母脂肪酶的体外水解模型及在饲料添加剂中的应用

发布时间：2018-03-10 20:54

  本文选题：微生物脂肪酶　切入点：解脂耶氏酵母　出处：《上海应用技术大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：微生物脂肪酶具有较高的水解、酯化和转酯活力,在脂合成、生物柴油制备和对映体拆分等领域应用十分广泛。因其稳定性差等不良因素,微生物脂肪酶在饲料工业中的应用范围较窄。本实验室成功构建一种新型解脂耶氏酵母脂肪酶,然后在适宜保护剂的作用下,获得了具有较高稳定性的脂肪酶制剂。本文研究了四种不同来源微生物脂肪酶的酶学性质对比,同时在动物试验中,研究了解脂耶氏酵母脂肪酶在肉鸡饲养过程中的添加效果,对肉鸡生长性能、脂质代谢及其安全性进行了全面评估。主要研究工作和结果摘要如下:1.对解脂耶氏酵母脂肪酶(YLL)与皱褶假丝酵母脂肪酶(CRL)、梳棉状嗜热丝胞菌脂肪酶(TLL)和米根霉脂肪酶(ROL)进行对比,得到4种不同来源的脂肪酶在最适温度、pH,热稳定性及pH稳定性的差异。进而对YLL的底物特异性及动力学参数进行了探究。YLL的最适温度为40℃,在30℃和40℃孵育2小时后,YLL具有最佳的稳定性,残余酶活分别为85%和80%左右;在pH 2-9范围内比较了四种不同脂肪酶的稳定性,YLL在低pH下展现了最佳的稳定性,在pH 5的条件下孵育2小时后,残余酶活均在50%以上。YLL的最适底物为对硝基苯酚棕榈酸酯(C16),对长链单甘酯(C14、C16、C18)有较好的水解效果。2.考察了 YLL体外水解大豆油的最佳条件,测定不同时间梯度下的水解率。水解大豆油的最佳反应条件为:反应时间6h、温度40℃、加酶量600 U、水油比3: 1。添加保护剂喷雾干燥获得两种YLL剂型,并在体外模拟动物内消化环境,对产生的酶解产物进行定性定量分析。两种剂型展现了较好的稳定性,在孵育2 h后分别具有55%和48%的残余酶活,其中,剂型A(YLL+20%脱脂奶粉)具有最佳的稳定性。并以肉鸡大豆油饲料为底物,添加相同酶活力单位的YLL上清液和YLL剂型,反应6 h后,利用气相色谱仪检测饲料油脂中关键脂肪酸的含量,发现YLL剂型相比于游离酶展现了较高的水解率,其中,对于脂肪酸C18: 2,剂型A达到65%的水解率,剂型B达到58%的水解率。3.开展了解脂耶氏酵母脂肪酶在白羽肉鸡中的饲养效果研究。考察了在白羽肉鸡的日粮中添加解脂耶氏酵母脂肪酶,对生长性能和血液生化指标的影响,并对肠道微生物菌群的变化进行了研究。结果显示添加脂肪酶显著降低了料重比(FCR, P0.05),提高了血清中甘油三酯的含量(P0.05)。4.还开展了脂肪酶及单细胞蛋白添加剂对肉鸡饲用安全性的全面评估。结果显示单独添加酵母菌和脂肪酶以及混合添加酵母菌和脂肪酶的5组与对照组相比,屠宰率、全净膛率、胸肌率、腿肌率、腹脂率、内脏指数、空肠长度指数均无显著差异,展现了良好的饲用安全性。
[Abstract]:Microbial lipase has high hydrolysis, esterification and transesterification activity. It is widely used in lipid synthesis, biodiesel preparation and enantiomeric resolution. Microbial lipase was used in feed industry in a narrow range. A novel lipase was successfully constructed in this laboratory, and then it was used as a protective agent. A stable lipase preparation was obtained. The enzymatic properties of four different microbial lipases were studied. In animal experiments, the effects of lipase addition by yeasts in broiler breeding were studied. To the growth performance of broilers, A comprehensive evaluation of lipid metabolism and its safety was carried out. The main research work and results were summarized as follows: 1. Lipase of YLL) and CRLL, TLL) and Rhizopus oryzae Lipase of Candida crassifolia, TLL) and Rhizopus oryzae. For comparison, The difference of pH, thermal stability and pH stability of lipases from four different sources was obtained. The substrate specificity and kinetic parameters of YLL were investigated. The optimum temperature of lipase was 40 鈩，

本文编号：1595039