生长抑制素基因工程亚单位疫苗对小鼠生长的影响

发布时间：2018-03-10 21:09

本文选题：生长抑制素　切入点：pET-32a表达系统　出处：《上海海洋大学》2015年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：构建带有生长抑制素的p ET-32a-2SS28-SS14和p ET-32a-3SS28原核表达质粒并检测其在大肠杆菌中的表达,并用所表达的目的蛋白制成生长抑制素亚单位疫苗,将该疫苗免疫小鼠,研究其对小鼠生长的影响,探讨生长抑制素亚单位疫苗免疫小鼠后对促进生长效果的性别差异性,并研究生长抑制素不同亚型串联后对促进小鼠生长的不同效果。为研究获得经济高效的生长抑制素亚单位疫苗,以提高经济动物的生产效率。1.p ET-32a-2SS28-SS14和p ET-32a-3SS28原核表达质粒的构建选用生长抑制素的两种亚型SS-14和SS-28,将其混合串联到p ET-32a表达系统中,得到p ET-32a-2SS28-SS14和p ET-32a-3SS28两种重组质粒。并通过PCR扩增和测序鉴定表明,目的基因在p ET-32a质粒中的插入位点,序列以及方向完全正确。2.2SS28-SS14和3SS28目的蛋白的表达与纯化将p ET-32a-2SS28-SS14和p ET-32a-3SS28两种重组质粒转化到E.coli BL21 De3中,通过IPTG诱导大肠杆菌介导表达出目的蛋白,并通过western blot分析鉴定,所表达蛋白为目的蛋白。将菌体超声破碎后离心对目的蛋白进行可溶性分析以后,将上清进行蛋白纯化,获得纯化的目的蛋白。3.生长抑制素亚单位疫苗的制备以及动物免疫将诱导纯化的目的蛋白与佐剂混合乳化制成生长抑制素亚单位疫苗,免疫小鼠,选用4周龄离乳昆明鼠60只,雌雄各半。将雌雄各随机分3组,每组10只,对每只做好编号标记。按如下分组进行免疫:2SS28-SS14♀:免疫2SS28-SS14蛋白的雌鼠;2SS28-SS14♂:免疫2SS28-SS14蛋白的雄鼠;328AA♀:免疫3SS28蛋白的雌鼠;328AA♂:免疫3SS28蛋白的雄鼠;空白♀:注射生理盐水白油乳化溶液的雌鼠;空白♂:注射生理盐水白油乳化溶液的雄鼠。对4周龄的小鼠初始体重的测定记录,并对其进行首次免疫。实验组每只小鼠免疫100ug蛋白量的相应剂量疫苗,对照组注射等剂量的生理盐水白油乳化溶液对照。1周后再进行一次加强免疫,实验组每只小鼠免疫50ug蛋白量的相应剂量疫苗,对照组注射等剂量的生理盐水白油乳化溶液对照。从4周龄开始到7周龄,每周对小鼠体重做一次称重记录。采用SPSS进行统计学分析。免疫两种疫苗的雌鼠的实验组与空白对照组平均增重相比,差异均不显著(P0.05)。免疫3SS28疫苗的雄鼠实验组与空白对照组平均增重相比,免疫后第1、第2周体重增加不显著(p0.05),第3周平均增重显著高于空白对照组(P0.05)。免疫2SS28-SS14疫苗的雄鼠实验组与空白对照组平均增重相比,免疫后第1、第2周平均增重显著高于空白对照组(p0.05),第3周差异极为显著(P0.01)。说明生长抑制素不同亚型的亚单位疫苗对昆明鼠生长影响性别差异性较大;从雄鼠的增重效果来看,SS-14亚型的免疫增重效果优于SS-28亚型,说明生长抑制素不同亚型的免疫原性有所差异,导致免疫效果的不同。综上所述,本研究通过基因克隆技术成功重组构建p ET-32a-2SS28-SS14和p ET-32a-3SS28原核表达质粒并检测其在大肠杆菌中表达。并将表达的目的蛋白纯化后制备成生长抑制素亚单位疫苗免疫小鼠,发现免疫3SS28疫苗的雄鼠实验组与空白对照组平均增重相比差异显著(P0.05)。免疫2SS28-SS14疫苗的雄鼠实验组与空白对照组平均增重相比差异极为显著(P0.01)。而两种疫苗对雌鼠均无明显差异性。因此本次研究为获得经济高效的生长抑制素亚单位疫苗和后续将生长抑制素亚单位疫苗应用到动物生产提供了理论基础和方向。
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【学位授予单位】：上海海洋大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S852.4

【参考文献】