羊口疮病毒蛋白ORFV035的表达、纯化和多克隆抗体的制备

发布时间：2018-03-12 07:14

  本文选题：羊口疮病毒　切入点：ORFV　出处：《生物技术通报》2017年07期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：克隆表达羊口疮病毒蛋白ORFV035,并制备其多克隆抗体,为后续对病毒复制、装配、形态发生和成熟过程的研究奠定基础。PCR扩增羊口疮病毒ORFV035基因,将其与质粒pET-30a(+)经Bam HⅠ和HindⅢ双酶切后连接,构建重组质粒pET30a-035。重组质粒经双酶切和测序鉴定,转化感受态大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定蛋白表达情况。表达产物进行超声破碎和Ni柱纯化,纯化后目的蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体并对其进行鉴定。成功构建了重组质粒pET30a-035,在大肠杆菌BL21中以包涵体形式高效表达。包涵体洗涤、溶解后进行Ni柱纯化,得到纯度较高的ORFV035-his融合蛋白。以纯化蛋白免疫小鼠获得多克隆抗体。Western blot检测显示该多抗可以识别天然ORFV035蛋白。成功诱导表达、纯化ORFV035蛋白并制备ORFV035多克隆抗体。
[Abstract]:Sheep mouth sore virus protein ORFV035 was cloned and expressed, and its polyclonal antibody was prepared, which laid a foundation for further study on virus replication, assembly, morphogenesis and maturation. The recombinant plasmid pET30a-035was ligated with pET-30a () by Bam H 鈪，

本文编号：1600529