牛mettl3基因的原核表达与蛋白纯化

发布时间：2018-03-16 06:01

  本文选题：牛　切入点：METTL　出处：《东北农业大学学报》2017年08期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：m~6A甲基转移酶(methyltransferase-like protein 3,METTL3)可调控m RNA的m6A甲基化水平,调节细胞蛋白质合成,实验室前期发现METTL3为乳腺上皮细胞乳合成重要调节分子,发挥泌乳调节作用。目前尚不清楚METTL3分子结构基础及其参与的调节机制。为揭示METTL3结构与功能关系,对METTL3蛋白作原核表达及纯化。研究采用PCR方法扩增牛mettl3基因完整CDS区,将CDS区插入原核表达载体p GEX-4T-1,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导METTL3蛋白大量表达,用8 mol·L-1尿素裂解包涵体,利用GST蛋白纯化试剂盒纯化诱导获得METTL3蛋白。SDS-PAGE证实GST-METTL3融合蛋白存在于包涵体内,试验获得高纯度GST-METTL3融合蛋白,为进一步研究METTL3蛋白在奶牛泌乳中作用提供重要依据。
[Abstract]:Methyltransferase-like protein 3 (METTL3) can regulate m6A methylation level of m RNA and regulate cell protein synthesis. METTL3 was found to be an important regulatory molecule in mammary epithelial cell milk synthesis. In order to reveal the relationship between the structure and function of METTL3, the prokaryotic expression and purification of METTL3 protein were studied. The complete CDS region of bovine mettl3 gene was amplified by PCR. The CDS region was inserted into the prokaryotic expression vector pGEX-4T-1. Isopropyl thiothio- 尾 -Dgalactoside (IPTG) induced a large number of METTL3 protein expression, and the inclusion body was decomposed with 8 mol 路L -1 urea. METTL3 protein. SDS-PAGE of GST protein purification kit showed that GST-METTL3 fusion protein existed in inclusion body, and high purity GST-METTL3 fusion protein was obtained, which provided important basis for further study on the role of METTL3 protein in dairy cow lactation.
【作者单位】： 东北农业大学黑龙江省高校农业生物功能基因重点实验室;
【基金】：国家高技术研究发展计划(863计划)项目(2013AA102504-03)
【分类号】：S823

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