水泡性口炎病毒M蛋白双抗体夹心ELISA检测方法的建立及应用

发布时间：2018-03-31 22:22

  本文选题：水泡性口炎病毒　切入点：M蛋白　出处：《吉林大学》2017年硕士论文

【摘要】：水泡性口炎(Vesicular stomatitis,VS)是由水泡性口炎病毒(Vesicu1ar stomatitis virus,VSV)感染而引起的一类人畜共患传染病,是一类具有高度接触性的传染病。该病作为一种虫媒性传染病,患病动物、隐形带毒者、库蚊都是主要的传播者和带毒者,主要通过唾液以及水泡液排到外环境中,也可在体内发生经卵传递。临床上,可感染多种哺乳动物,以在感染动物的口腔、唇部、舌、乳头以及感染动物的蹄冠等部位黏膜或皮肤出现水泡性口炎病变为特征;此外,还能够引起感染动物脑膜脑炎的发生,出现明显的神经症状。人也可偶尔感染,出现流感样症状,有时甚至会引起病毒性脑炎。由此可见,水泡性口炎具有重要的公共卫生学意义,其不仅对养殖业会造成一定的损失,而且对于人类的健康也存在一定的威胁。水泡性口炎的症状与一些疾病极为相似,比如:口蹄疫(FMD)、猪水疱疹病(VES)、猪水泡病(SVD)等,临床上很容易造成误诊,并很可能导致疾病的扩散。因此,临床上针对该类疾病的类症鉴别诊断具有重要的意义。目前,尽管存在许多检测VSV的方法,但传统的一些方法存在操作比较复杂、检测周期长、不利于临床的快速检测等缺点,而一些分子生物学方法虽然检测周期短且较为敏感,但是需要专业的实验设备以及专业的检测人员,而且有些方法极易出现假阳性结果造成误诊。双抗体夹心ELISA检测方法克服了传统检测方法的一些弊端,具有操作简便、检测周期短结果稳定的特点;同时,该方法敏感性良好,特异性高,能够达到分子生物学的检测水平,而且该方法不需要专业的实验设备及较高的实验条件,比分子生物学检测技术更适合临床大规模的检测,所以双抗体夹心ELISA检测方法在兽医临床上受到越来越广泛的应用。在本实验中,我们以实验室前期制备的VSV单克隆抗体作为捕获抗体,以制备的兔抗VSV-M蛋白多克隆抗体作为检测抗体,建立VSV-M蛋白双抗体夹心ELISA检测方法。通过对ELISA检测方法条件的优化,建立最优的VSV-M蛋白双抗体夹心ELISA检测方法,并对该方法的灵敏性、特异性、重复性以及符合率等性能进行评价,结果显示:该方法灵敏性高,最低可检测2.5μg/m L的病毒;特异性强,在检测VSV、SVDV、FMDV、ORFV时,仅VSV检测结果显示为阳性,其余三种病毒检测结果均显示为阴性;重复性检测结果显示,该检测方法的重复性变异系数小于10%;符合率测定结果显示,该方法与RT-PCR方法的符合率为97%。以上结果表明,本试验所建立的VSV-M蛋白双抗体夹心ELISA检测方法具有灵敏性高、特异性强、重复性好等优点。之后,我们应用该方法对采集自吉林省农安、松原等地区牛群中200份牛口腔拭子进行检测,同时以RT-PCR检测方法进行对比验证,结果显示,临床采集的200份牛口腔拭子样本的检测结果均为阴性,该结果与RT-PCR检测结果一致。因此,VSV-M蛋白双抗体夹心ELISA检测方法的建立将为水泡性口炎的预警、预报及防控提供技术支撑,进而产生潜在的经济和社会效益。
[Abstract]:Vesicular stomatitis (Vesicular stomatitis VS) is composed of vesicular stomatitis virus (Vesicu1ar stomatitis, virus, VSV) infection caused by a zoonotic disease, is a highly contagious disease. The disease is a kind of insect borne infectious diseases, the prevalence of animal, stealth virus, Culex are the main disseminators and carriers, mainly through saliva and blisters to external environment, but also transovarial transmission occurs in vivo. Clinically, it can infect mammals, in infected animal mouth, lips, tongue, nipple and infected animal Coronet and other parts of mucosal or skin to appear the characteristics of vesicular stomatitis disease; in addition, can also cause infection animal meningoencephalitis, obvious neurological symptoms. People can also occasionally infections, flu like symptoms, sometimes even cause viral encephalitis. Thus, vesicular stomatitis 鍏锋湁閲嶈�佺殑鍏�鍏卞崼鐢熷�︽剰涔�,鍏朵笉浠呭�瑰吇娈栦笟浼氶�犳垚涓，

本文编号：1692735