羊肠道病毒单克隆抗体的制备及鉴定

发布时间：2018-05-30 00:25

  本文选题：羊肠道病毒 + 单克隆抗体　； 参考：《中国兽医学报》2017年08期

【摘要】：根据本实验室分离的国内首株羊肠道病毒CEV-JL14的核苷酸基因组序列,设计并合成了羊肠道病毒VP1基因的引物,并应用RT-PCR扩增了VP1基因片段。扩增的VP1基因片段克隆到原核表达载体pGEX-4T-1的EcoRⅠ/BamHⅠ的酶切位点。重组质粒经酶切鉴定和序列测定正确后,转化到BL21,并以IPTG诱导表达了VP1重组蛋白。重组蛋白纯化后以弗氏完全佐剂乳化,按一定的程序免疫BALB/c小鼠,加强免疫3次后,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,经过3次亚克隆获得了5株表达VP1单克隆抗体的杂交瘤细胞株。以ELISA对杂交瘤分泌的IgG亚类进行了鉴定,结果4株为IgG1亚类,1株为IgG2b。以免疫酶单层细胞技术鉴定了单克隆抗体,结果显示,获得的单克隆抗体可以特异性检出羊肠道病毒抗原。本试验在国内首次获得了抗羊肠道病毒的单克隆抗体,将为羊肠道病毒的致病机理、诊断及流行病学研究奠定基础。
[Abstract]:According to the nucleotide genome sequence of the first sheep enterovirus CEV-JL14 isolated in our laboratory, the primers of VP1 gene of sheep enterovirus were designed and synthesized, and the VP1 gene fragment was amplified by RT-PCR. The amplified VP1 gene fragment was cloned into the restriction site of EcoR 鈪，

本文编号：1953100