猪弓形虫和附红细胞体双重PCR检测方法的建立及应用

发布时间：2018-08-07 08:44

【摘要】：根椐Gen Bank中登录的猪弓形虫和附红细胞体核苷酸序列,分别设计2对引物,在建立各病原单项PCR技术的基础上,优化双重PCR反应条件,建立了2种病原的双重PCR检测方法,用这2对引物对同一样品中的弓形虫和附红细胞体核酸模板进行双重PCR扩增,结果可同时扩增弓形虫的241 bp,附红细胞体的748 bp的特异性片段,而对其它5份猪病原及对照的PCR扩增结果均为阴性。敏感性测定结果表明,该双重PCR技术能检出0.1 pg的弓形虫和0.1 pg的附红细胞体模板。用72份临床病料对此研究双重PCR技术和单项PCR技术进行对比验证,结果显示,两者总符合率为100%。表明建立的双重PCR检测方法具有特异、快速、准确的特点,可用于对这两种病原的同时检测和鉴别诊断。
[Abstract]:According to the nucleotide sequences of Toxoplasma gondii and Eperythrozoon entered in Gen Bank, two pairs of primers were designed. On the basis of establishing the single PCR technique of each pathogen, the conditions of double PCR reaction were optimized, and the double PCR detection methods of two pathogens were established. Two pairs of primers were used to amplify the template of Toxoplasma gondii and Eperythrozoon nucleic acid in the same sample. The results showed that the specific fragment of 241bp of Toxoplasma gondii and 748bp of Eperythrozoon could be amplified simultaneously. The results of PCR amplification for the other 5 pig pathogens and the control were negative. The sensitivity test showed that the double PCR technique could detect 0.1 PG Toxoplasma gondii and 0.1 PG Eperythrozoon template. The double PCR technique and single PCR technique were compared and verified with 72 clinical samples. The results showed that the total coincidence rate was 100%. The results showed that the dual PCR detection method was specific, rapid and accurate, and could be used for simultaneous detection and differential diagnosis of the two pathogens.
【作者单位】： 山东绿都生物科技有限公司;山东省滨州畜牧兽医研究院;
【基金】：山东省现代农业产业技术体系生猪产业创新团队项目(SDAIT-08-17)
【分类号】：S858.28

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本文编号：2169501