夹心ELISA定量检测猪圆环病毒2b型抗原方法的建立

发布时间：2018-09-05 09:07

【摘要】：为建立快速定量检测猪圆环病毒2b型(PCV2b)抗原含量的方法,本研究采用重组抗PCV2b纳米抗体作为捕获抗体,鼠抗PCV2b单克隆抗体为检测抗体,建立了定量检测PCV2b的夹心ELISA方法。该方法不仅能够用于猪圆环疫苗中PCV2b抗原的检测,还可用于大肠杆菌或杆状病毒表达的PCV2b衣壳蛋白(Cap)亚单位疫苗的检测,且与其它猪病毒无交叉反应。该方法检测细胞培养PCV2b的线性范围是104.3TCID50/mL~105.5TCID50/mL,样品回收率为89.3%~105.6%,该方法批内、批间变异系数小于5%,重复性好。该方法与间接免疫荧光方法(IFA)检测相同样品时误差值小于10%,并且ELISA检测结果离散度更小。分别用两种方法定量PCV2b抗原,取相同抗原量免疫猪,其诱导产生的PCV2b抗体效价无显著差异。本研究构建的夹心ELISA方法在定量猪圆环疫苗中PCV2b抗原方面,与传统的IFA方法比较其显示了良好的符合性,并具有更好的重复性和更短的检测周期,是替代IFA方法用于PCV2b定量检测的更优选择。
[Abstract]:In order to establish a rapid and quantitative method for quantitative detection of porcine circovirus type 2b (PCV2b) antigen, a sandwich ELISA method for quantitative detection of PCV2b was established by using recombinant anti PCV2b nanometer antibody as capture antibody and mouse anti PCV2b monoclonal antibody as detection antibody. This method can be used not only for the detection of PCV2b antigen in porcine circoid vaccine, but also for the detection of PCV2b capsid protein (Cap) subunit vaccine expressed by Escherichia coli or baculovirus without cross-reaction with other porcine viruses. The linear range of this method for the detection of PCV2b in cell culture was 104.3 TCID50 / mL+ 105.5 TCID50 / mL, and the sample recovery was 89.3% and 105.6.The coefficient of variation between batches of the method was less than 5 and the reproducibility was good. The error value of this method is less than 10 and the dispersion of ELISA detection results is smaller than that of indirect immunofluorescence method (IFA). There was no significant difference in the titer of PCV2b antibody induced by the two methods in immunizing pigs with the same amount of PCV2b antigen. Compared with the traditional IFA method, the sandwich ELISA method proposed in this study showed good conformance with the traditional IFA method in quantifying PCV2b antigen in porcine circoid vaccine, and had better reproducibility and shorter detection period. It is a better alternative to IFA method for quantitative detection of PCV2b.
【作者单位】： 江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术中心;江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心;
【基金】：江苏省农业自主创新专项[CX(14)2089、CX(15)1026]
【分类号】：S852.651

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本文编号：2223827