小鼠黑色素细胞体外分离培养及生物学特性研究

发布时间：2018-10-17 21:18

【摘要】：黑色素细胞所合成色素的种类、数量及分布与被毛颜色密切相关,本试验对小鼠黑色素细胞进行体外分离培养并研究其生物学特性,筛选出研究基因功能的理想材料。试验及结果如下：1.用0.25%Dispase酶Ⅱ和0.25%胰酶/0.02% EDTA分离到的小鼠黑色素细胞形态呈典型的多树突状或双极形,树突细长,伴有特殊生长晕。2.对传代的4代、7代、10代和13代细胞经多巴染色后发现,细胞的胞质、树突和胞核均成棕褐色;用免疫细胞化学染色对细胞内的S-100、MITF、TYR、TYRP1和TYRP2蛋白进行鉴定,发现细胞内均有阳性信号,具有黑色素细胞的生物学特征。3.用qRT-PCR检测不同代数细胞中MITF、TYR和TYRP1 mRNA的表达水平,结果显示：与4代细胞相比,7、10代细胞内基因表达量变化不大；而13代细胞中TYR和TYRP1表达量显著升高,具有黑色素瘤细胞的特征。4.用iCelligence实时检测不同代数细胞的贴壁和增殖,结果发现培养2h后,各代细胞均开始贴壁增殖;培养40 h后,4、7、10代细胞增殖基本达顶峰,之后细胞数减少,而13代细胞可维持到100 h左右,之后细胞数维持恒定,其增殖力比其他3个代数细胞强,具有黑色素瘤细胞的特征。5.在13代细胞培养基中加入a-MSH,培养72h, MITF、TYR和TYRP2 mRNA表达水平分别是对照组的1.528、4.623和1.489倍。结论：13代细胞具有较强的增殖能力且TYR基因的表达量显著升高,可能转化为黑色素瘤细胞。因此,10代前的小鼠黑色素细胞是研究黑色素形成过程的理想材料。
[Abstract]:The species, quantity and distribution of melanocytes were closely related to the color of the coat. In this experiment, the melanocytes of mice were isolated and cultured in vitro and their biological characteristics were studied, and the ideal materials for studying gene function were screened out. The results are as follows: 1. The melanocytes isolated from mice with 0.25%Dispase 鈪，

本文编号：2278013