水貂肠炎病毒VP2基因的原核表达及多克隆抗体的制备

发布时间：2018-11-03 19:44

【摘要】：利用原核表达系统表达水貂肠炎细小病毒(MEV)VP2衣壳蛋白,以制备抗VP2超免疫血清。根据VP2的基因序列,设计1对特异性引物,以MEV全基因组重组质粒p B-MEV-L为模板,利用PCR技术扩增出MEV VP2片段,并定向克隆到pET-32a载体中,经酶切与序列测定,证明成功构建了VP2基因原核表达质粒pET-MEV-VP2。将其转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后实现了高效表达。免疫印迹试验表明,获得的重组蛋白具有较好的反应原性。以该蛋白为免疫原免疫新西兰兔,制备抗血清,四免后用ELISA方法检测其效价达到1∶1 024。免疫荧光试验证明,获得的抗体具有良好的结合活性。为MEV的病原生物学研究奠定基础。
[Abstract]:(MEV) VP2 capsid protein of mink enteritis virus was expressed by prokaryotic expression system to prepare anti VP2 superimmune serum. According to the gene sequence of VP2, a pair of specific primers were designed. The MEV VP2 fragment was amplified by PCR using the recombinant plasmid p B-MEV-L of MEV genome as template, and cloned into pET-32a vector, and then was digested and sequenced. It was proved that the prokaryotic expression plasmid pET-MEV-VP2. of VP2 gene was successfully constructed. It was transformed into Escherichia coli BL21 (DE3) and highly expressed by IPTG induction. Western blotting test showed that the recombinant protein had good reactivity. The antiserum was prepared by immunizing New Zealand rabbits with this protein. The titer of the antiserum was detected by ELISA method at 1:1. Immunofluorescence assay showed that the obtained antibody had good binding activity. To lay a foundation for the study of pathogenic biology of MEV.
【作者单位】： 新疆农业大学动物医学学院;中国农业科学院北京畜牧兽医研究所;中国农业大学生物学院;
【基金】：国家高技术研究发展计划(863)项目(2011AA10A213) 中国农业科学院创新工程项目(ASTIP-IAS15)
【分类号】：S852.65

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