【摘要】：本实验旨在探索LPS模拟的炎症模型下,猪背最长肌中能量代谢的变化,以期能全面的评价炎症对猪骨骼肌的影响,并阐明可能的机制,为今后找到合适的缓解治疗药物提供理论基础。实验分为两组:正常对照组和LPS处理组,分析肌肉中ATP、ADP等的浓度,研究LPS处理后肌肉糖酵解水平、线粒体功能和内质网功能的变化情况,并检测了胞浆和线粒体中钙离子浓度的变化;此外还分析了 LPS处理对肌肉生长分化相关调节因子基因表达情况的影响。1 LPS处理对猪背最长肌能量代谢的影响选择12 ± 0.5 kg的雄性杜x长x大三元仔猪12头,按体重相接近随机分为2组:对照组和LPS(15 μg/kg BW)注射组,对照组注射相同体积的生理盐水。注射6 h后屠宰采样,用含抗凝素的EP管收集颈部静脉血液样品,并制得血清同采集的肌肉组织一并放入-80℃冰箱保存。利用全自动生化分析仪,检测血液中的血糖和乳酸含量;利用高压液相检测肌肉组织中ATP、ADP等能量基本物质的含量;利用试剂盒检测了相关酶活和钙离子浓度;并利用RT-PCR和Western Blot技术检测了相关基因、蛋白的表达水平。结果显示,LPS注射6h后血糖并没有发生显著性变化,但是血液中乳酸却显著性上升。NADH的含量显著性上调(P0.05),NADH/NAD+的比值和ATP的含量有上升的趋势(P=0.064);ATP、ADP、AMP和NAD+无显著性变化。糖酵解的大部分关键基因都显著性上升(P0.05);糖酵解通路的3个关键酶HK、LDH和PK的酶活都显著性上调了(P0.05)。线粒体自身编码的基因并没有显著性变化,但是线粒体复合物I和Ⅳ的酶活显著性上升(P0.05),而线粒体中ATP的含量显著性下降(P0.05)。UCP3的基因显著性上调(P0.05),蛋白无显著性变化。由于线粒体和内质网功能之间相互偶联,我们检测了内质网的状态,结果显示内质网应激的大部分基因都显著性上调,标志性蛋白BIP显著性下降(P0.05),CHOP蛋白显著性上调(P0.05)。钙离子的检测结果显示,细胞内总体钙离子的浓度无显著性变化,但是线粒体内的钙离子浓度显著升高(P0.05)。我们的结果提示LPS处理显著增强了肌细胞的糖酵解途径,并可能通过内质网和线粒体之间的钙交流,介导了肌细胞线粒体的功能紊乱。2肌肉注射LPS对猪背最长肌生长相关基因的影响选择12头体重约为12 ± 0.5 kg的雄性杜x长x大三元仔猪,并随机分为2组:对照组和LPS(15μg/kgBW)注射组,对照组注射相同体积的生理盐水。注射6 h后屠宰采样,样品保存于-80℃冰箱。RT-PCR的结果显示LPS处理组IGF-1的基因显著性下降(P0.05),但是IGF1R和mTOR的基因表达无显著性变化。自噬相关基因LC3显著性上升了(P0.05),ULK和ATG6有上升的趋势(P =0.063),ATG7和ATG9无显著性变化。蛋白检测的结果显示ATG7无显著性变化。检测泛素蛋白酶系统的几个关键基因的变化,结果显示Foxo1、atrogin-1和MuRF-1的基因显著性上调(P0.05)。蛋白检测的结果显示MuRF-1无显著性变化。MSTN的基因和蛋白表达水平均无显著性变化。检测MRFs家族的基因和蛋白表达,结果显示MyoD和MyoG都显著性下降(P0.05),而Myf5和Myf6的基因显著性上调(P0.05)。MyoG、Myf5和Myf6的蛋白检测显示其表达均无显著性变化。我们的结果提示LPS注射后显著下调了 IGF-1的表达,同时也增加肌肉萎缩的自噬和泛素蛋白酶系统相关基因的表达,可能对肌肉生长产生不利影响。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：南京农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S828
【参考文献】
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2311066
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