siRNA干扰Wnt11对鸭成肌细胞增殖的影响

发布时间：2018-11-29 11:19

【摘要】：为了探究Wnt11(无翅型MMTV整合位点家族成员11)对鸭骨骼肌成肌细胞增殖的影响以及可能与Wnt11相关的信号通路,采用体外分离培养鸭骨骼肌成肌细胞,脂质体介导siRNA(小干扰RNA)转染干扰基因的表达,qRT-PCR(实时荧光定量PCR)检测基因表达变化,Ed U(5-乙炔基-2'-脱氧尿苷)染色分析细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期变化及信号通路抑制剂处理。结果显示:干扰Wnt11的表达后,增殖相关基因CCND1(细胞周期蛋白D1)、CDK6(周期蛋白依赖性激酶6)和PCNA(增殖细胞核抗原)的表达量极显著降低(P0.01),Ed U阳性细胞数极显著降低(P0.01),处于S期的细胞数显著降低(P0.05);当用Akt(蛋白激酶B)抑制剂处理鸭成肌细胞后,Wnt11表达量显著降低(P0.05),而干扰Wnt11表达后,PI3K(磷脂酰肌醇-3-羟激酶)和Akt的表达量显著升高(P0.05)。提示:Wnt11在鸭成肌细胞增殖过程中有重要调控作用,Wnt11发挥调控作用需要PI3K/Akt信号通路参与,且二者间存在反馈作用。
[Abstract]:To investigate the effect of Wnt11 (wingless MMTV integration site family 11) on the proliferation of duck skeletal muscle myoblasts and the signal pathways associated with Wnt11, duck skeletal muscle myoblasts were isolated and cultured in vitro. Liposome mediated siRNA (small interfering RNA) transfection interference gene expression, qRT-PCR (real-time fluorescent quantitative PCR) detection of gene expression changes, Ed U (5-acetyl-2 deoxyuridine staining analysis of cell proliferation. Cell cycle changes and signal pathway inhibitor treatment were detected by flow cytometry. The results showed that the expression of proliferation-related genes CCND1 (cyclin D1), CDK6 (cyclin dependent kinase 6) and PCNA (proliferating cell nuclear antigen) decreased significantly after interfering with Wnt11 expression (P0.01). The number of Ed U positive cells decreased significantly (P0.01), and the number of S phase cells decreased significantly (P0.05). After treated with Akt (protein kinase B) inhibitor, the expression of Wnt11 decreased significantly (P0.05), but after interfering with Wnt11 expression, the expression of PI3K (phosphatidylinositol-3-hydroxykinase) and Akt increased significantly (P0.05). The results suggest that Wnt11 plays an important role in the proliferation of duck myoblasts, and Wnt11 plays a role in the regulation of PI3K/Akt signaling pathway, and there is feedback between them.
【作者单位】： 南京农业大学动物科技学院;南京市畜牧家禽科学研究所;
【基金】：江苏省农业科技自主创新资金项目(CX(11)1033) 国家科技支撑项目(2013BAD20B05)
【分类号】：S834

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