牛源麦氏弧菌ASP基因的克隆与原核表达

发布时间：2018-12-08 17:47

【摘要】：为获得牛源麦氏弧菌重组碱性丝氨酸蛋白酶(ASP),笔者扩增并构建了以麦氏弧菌FD39-1的ASP基因为插入片段的重组表达质粒p ET32a-ASP,将该质粒转化至大肠杆菌Rosetta中诱导表达并纯化,采用SDS-PAGE与Western-blot技术检测目的蛋白是否表达成功。结果显示,扩增的ASP基因与GenBank中相应基因序列(Kp126900.1)的同源性达100%。ASP基因在大肠杆菌中成功表达,表达蛋白相对分子质量大小约为58 ku,与预期一致。Western-blot显示在预期位置出现阳性条带。本研究为麦氏弧菌ASP的生物学特性与亚单位疫苗的制备奠定了基础。
[Abstract]:In order to obtain recombinant alkaline serine protease (ASP), of Vibrio vibrio from cattle, the recombinant expression plasmid p ET32a-ASP, was constructed with the ASP base of FD39-1 as the inserted fragment. The plasmid was transformed into Escherichia coli Rosetta for expression and purification. SDS-PAGE and Western-blot techniques were used to detect the expression of the target protein. The results showed that the homology between the amplified ASP gene and the corresponding gene sequence (Kp126900.1) in GenBank was similar to that of 100%.ASP gene expressed in E. coli, and the relative molecular weight of the expressed protein was about 58 ku,. As expected. Western-blot shows positive bands in the expected position. This study laid a foundation for the biological characteristics of ASP and the preparation of subunit vaccine.
【作者单位】： 西南大学荣昌校区动物医学系;重庆市兽医科学工程研究中心;
【基金】：“十二五”国家科技支撑计划项目(2011BAD36B00) 重庆市重点科技攻关资助项目(cstc2012jcsfjfzhX0021) 重庆高校创新团队建设计划(CXTDG201602003)
【分类号】：S852.65

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本文编号：2368742