感染日本血吸虫引起宿主循环MicroRNAs表达变化的研究

发布时间：2019-04-24 21:54

【摘要】：日本血吸虫病是人兽共患,严重的危害了人类和动物健康。虽然,我国血吸虫病的防控取得了举世瞩目的成就,但是随着近来气候变暖、生态和经济社会等因素的变化,血吸虫病防控又面临诸多新的挑战。为了更好的控制血吸虫病,需要利用现代分子生物技术系统研究血吸虫病原生物学,深入揭示血吸虫感染和寄生虫的分子机理,开拓血吸虫病防控的新途径。本论文主要研究了感染了日本血吸虫后终末宿主体内循环性microRNAs的变化,主要分为以下两方面:1)感染日本血吸虫宿主体内循环micro RNAs(Circulating microRNAs)序列测定以及靶基因功能预测分析;2)qRT-PCR验证分析。具体如下:一、利用生物信息学方法对获得小RNAs序列进行系统分析,鉴定与血吸虫感染相关的循环性miRNAs并预测其功能。在本研究中,两次生物学重复实验中共发现173条miRNAs差异表达。进一步分析表明感染后有64个已知miRNAs在P1和P2呈现差异表达(差异倍数在两倍以上),其中12个下调,52个上调。将P1与P2(P1:感染后14、28天后大白兔血浆所建的库;P2:感染后10、14、28、32天后大白兔血浆所建的库)分别与未感染的家兔血浆小RNA库进行比对,获得感染后特有的小RNAs并进行分类分析。对未注释的特异性的小RNA进行新miRNAs预测,结果表明P1有191条新miRNAs,P2中有190条新miRNAs。对感染后宿主特异性表达的循环miRNAs以人的数据库为参考进行靶基因预测,结果表明在124个miRNAs中按照最严谨的条件(只考虑五个软件都能预测到的靶基因),我们共获得了18个miRNAs以及它们所调控的共416条靶基因。用David数据库提供的在线工具Pather进行了靶基因GO聚类分析,结果表明主要参与包括细胞进程、代谢调控、生命调控、发育进程等生物学进程。分子功能分析表明主要参与结合、催化活性等分子功能。KEGG代谢调控分析表明,这些miRNAs主要与信号调节通路相关如有13个靶基因参与了整联素信号通路,9个参与了p53通路,8个参与了促性腺释放激素受体通路等二,q-RT PCR验证分析。选取了10个差异表达的microRNAs进一步利用实时定量PCR进行验证分析,结果表明所选取的10个miRNAs表达与Solex测序结果一致。其中miR-10在感染日本血吸虫的新西兰大白兔的血浆中是上调的,而miR-10的上调与某些癌症相关,因此我们的结果对进一步探索miR-10在宿主与日本血吸虫的相互作用打下了基础。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：中国农业科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S855.9

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本文编号：2464821