通辽地区犊牛腹泻大肠杆菌的分离鉴定及产肠毒素型大肠杆菌F41菌毛基因的克隆表达

发布时间：2020-03-18 04:20

【摘要】：通辽是内蒙古自治区的养牛大市,素有“黄牛之乡”的美誉,近些年,随着养牛数量的增加,犊牛腹泻呈现逐年增长的趋势,已严重影响到养牛业的发展。产肠毒素型大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)是导致犊牛腹泻的主要致病菌之一,该菌导致犊牛发病且有较高的发病率及死亡率。如何制定有效合理的预防措施及高效安全的疫苗预防犊牛腹泻大肠杆菌病迫在眉睫。本研究通过对通辽市地区从2015年4月年至2017年4月期间的各养殖场及散户进行犊牛腹泻大肠杆菌发病情况调查,并采集样品,对犊牛粪便的致病菌分离纯化。通过生化试验、16S rRNA方法鉴定菌种,并确定其O-抗原血清型。经鉴定共分离致病性大肠杆菌186株,其中O175是通辽本地区优势血清型,因其含有F41菌毛。采用PCR技术扩增分离菌菌毛F41毒力基因,并构建重组质粒pET-28a-F41,转化至BL21中表达F41蛋白,通过Western blotting鉴定该蛋白的反应原性。并通过软件分析菌毛F41生物学特性。结果显示,表达的F41蛋白有较好的反应原性。生物信息学分析可知,F41蛋白为疏水性蛋白,理论等电点为5.02,该蛋白无跨膜螺旋区,处于细胞膜外,亚细胞定位显示分泌信号通路位点占比0.05,为非分泌蛋白,且蛋白具有良好的抗原性及柔韧性。本研究克隆表达的F41蛋白具有良好抗原性,相关生物学分析为今后的疫苗研究提供相应参考依据。
【学位授予单位】：内蒙古民族大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S858.23

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本文编号：2588203