白藜芦醇抑制犬乳腺肿瘤血管生成机制的探究

发布时间：2020-03-23 02:47

【摘要】：犬乳腺肿瘤是一种严重危害犬类健康的肿瘤性疾病,可以通过恶性增殖、转移、侵袭等生物性行为损伤脏器而导致器官衰竭。现阶段对于犬乳腺肿瘤多采用手术及放化疗法进行治疗,但通常治疗后会出现副作用,并且预后极易复发。白藜芦醇(Resveratrol)作为中药提取物,自从1997年被Jang M在《Nature》上发表文章论述了其抗肿瘤作用,近些年来白藜芦醇逐渐成为了抗肿瘤机制研究的热门靶点。本试验研究了白藜芦醇对犬乳腺肿瘤细胞血管生成机制及Notch信号通路是否具有影响及影响机制。选取状态相同的处于对数增长期的的犬乳腺肿瘤细胞株CHMm,采用10μM、20μM、40μM、80μM、160μM浓度的Res分别对细胞进行处理。然后收集各组细胞进行CCK-8细胞活性检测;Elisa检测血管再生因子(VEGF)、细胞基质金属蛋白酶(MMP-14)及缺氧诱导因子(HIF-1α)的含量;实时荧光定量PCR法对肿瘤细胞Notch1、Jagged1、Dll4及Hes-5基因的相对表达量进行检测;使用Western blot方法检测细胞内Notch1、Jagged1、Dll4及Hes-5蛋白的表达量。1.CCK-8对细胞毒性的检测结果发现,相同的作用时间,和空白对照组相比较,各浓度Res加药组对CHMm细胞的抑制影响效果极显著(p0.01)。相同Res作用浓度,培养48h与培养24h相比较,Res对细胞的抑制效果差异极显著(p0.01)。Res对CHMm细胞的抑制呈现出明显的时间与浓度依赖性。2.VEGF的检测结果表明,和空白对照组相比,除10μM浓度加药组的差异性不显著(p0.05),其余组都随着Res作用浓度的增加,VEGF含量降低效果极显著(p0.01)。因此,低浓度的Res对犬乳腺肿瘤细胞分泌VEGF量影响较弱,中、高浓度的Res对VEGF的分泌量具有显著抑制作用,呈浓度依赖性。3.HIF-1α的结果表明,与空白对照组相比较,随着Res作用浓度增加,HIF-1α含量降低极显著(p0.01)。因此,Res对犬乳腺肿瘤细胞分泌HIF-1α具有显著抑制作用且随Res作用浓度的增加抑制作用增强,呈浓度依赖性。4.MMP-14结果表明,与空白对照组相比较,10μM、20μM、40μM浓度Res加药组差异性不显著(p0.05),而80μM、160μM浓度组的差异性极显著(p0.01)。因此,低、中浓度的Res对犬乳腺肿瘤细胞分泌MMP-14含量没有太大影响,只有高浓度的Res才会对MMP-14的分泌量产生显著抑制效果。5.Notch相关因子mRNA表达结果表明,相同的作用时间,和空白对照组相比,各浓度Res给药组的目的基因Notch1、Jagged1的mRNA表达量下调显著(0.01p0.05),目的基因Hes-5、Dll4极显著(p0.01)。6.Notch相关因子蛋白表达量的检测结果表明,相同的作用时间,和空白对照组相比,各浓度Res给药组的目的蛋白Notch1、Dll4及Hes-5的表达量下调显著,但是Jagged组间的蛋白表达量的下调并不显著。因此,Res是通过调控Notch通路的Notch1受体、Dll4配体及Hes-5靶基因的相对表达量来抑制肿瘤的血管生成。白藜芦醇对犬乳腺肿瘤细胞具有增殖抑制作用,并通过对Notch通路相关因子基因和蛋白的表达来调控抑制细胞的血管再生。
【图文】：

示意图,白藜芦醇,化学结构,示意图

国悖理（French paradox）”现象，，首次揭示保护心血管作用的物质。Jang 等（1997）系统起始、发展及促进的三个阶段内都起着显著的热门，学者们进一步地验证了其对鼠的乳腺癌胞都具有显著的抑制效果。性质-5-trihydroxystilbene）化学名称为（E）-3，5子量为 228.25，纯化样品的外观为无色的针状8℃，达到 260℃即可发生升华，使用 365nm以和三氯化铁-铁氢化钾产生显色的反应，因。自然界内的白藜芦醇主要以 4 种形式存在：醇，若是受到紫外光的照射，白藜芦醇苷反式，存在于植物内的白藜芦醇是以稳定的反式糖子式如图 1-1 所示。

对照组

p<0.05Note: compared with the control group, **p<0.01， *p<0.05图2-1a 不同浓度Res对细胞抑制率的影响Fig 2-1a Effects of different concentrations of Res for cell inhibitory rate注：相同培养时间，与对照组相比**p<0.01，*p<0.05Note: compared with the control group, **p<0.01， *p<0.05各组别 24h 48h0μM 0.530±0.014 0.626±0
【学位授予单位】：沈阳农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S858.292

【参考文献】