利用芽孢杆菌降低猪源E.coli对β-内酰胺类抗生素耐药性的研究

发布时间：2020-04-03 10:06

【摘要】：本研究通过对185株猪源大肠杆菌进行药敏试验,检测它们对典型的β-内酰胺类抗生素的敏感程度,并从中筛选出对氨苄西林高度耐药的菌株,用以研究耐药菌株和敏感菌株的竞争关系。并探索性将益生芽孢杆菌与大肠杆菌耐氨苄西林菌株和敏感菌株放在试管群落中和养猪场模拟地面上进行混合培养,人为调节某些因素,并结合一些辅助措施,考察耐氨苄西林大肠杆菌菌株在这两种人工环境中的比例变化,为寻找降低养猪场耐药细菌危害的方法提供理论依据。1.应用改良影印培养法,考察耐氨苄西林大肠杆菌菌株(G414)起始比例、益生菌种类和营养水平对人造微生物群落中G414菌落比例变化的影响。结果:人造群落中耐药菌株生存竞争能力大于敏感菌株(ATCC 25922),其比例在1~7天均逐渐上升;高初始比例组的耐药菌落比例从33%上升至64%,绝对值增加31%,超过敏感菌株成为群落中的优势菌,低初始比例组从10%上升至43%;枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌在第1~7天能够显著放缓耐药株在群落中比例的升高趋势(P0.05),蜡样芽孢杆菌除开始两天外,可极显著地降低耐药菌落的比例(P0.01);在高(100%)、中(10%)、低(1%)营养条件下,耐药菌落比例均逐步升高,中营养水平组的比例上升最快。结论:耐氨苄西林大肠杆菌菌株并没有因携带耐药基因而升高其在无药环境中的竞争适应度代价,反而获得了在正常营养和低营养以及多物种竞争条件下的某种竞争优势,逐步成为人造群落中的优势菌群,传播出去,可能对公共卫生安全造成较大威胁;枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌只能降低耐药菌落比例上升的趋势,而蜡样芽孢杆菌可极显著地抑制耐药菌落的生长,促使其消亡,若加以开发利用,或许能降低养殖环境中某些耐药菌的数量。2.应用琼脂稀释法和倾注平板培养法,考察在模拟养猪场地面上喷洒蜡样芽孢杆菌、冲洗+喷洒蜡样芽孢杆菌、消毒+喷洒蜡样芽孢杆菌、冲洗+消毒+喷洒蜡样芽孢杆菌等几种措施下耐氨苄西林大肠杆菌菌落(G414)的耐药水平及相应比例在15天的内变化情况。结果:总体而言,试验组中耐氨苄西林大肠杆菌菌落的比例随时间降低,降低幅度在某些组间存在差异。结论:单独在模拟地面喷洒蜡样芽孢杆菌可能不能明显降低耐氨苄西林大肠杆菌菌落的比例,结合冲洗则与有对照组有明显差异(P0.05),亚最小杀菌浓度浓度的戊二醛对增强蜡样芽孢杆菌的效果似乎没有明显作用。
【图文】：

枯草芽孢杆菌,基因系统

图 2-3. 枯草芽孢杆菌 VPLGZU-1 16S rRNA 基因系统进化 MP 树Fig.2-3. B.subtilis VPLGZU-1 16S rRNA Gene Phylogenetic Maximum Parsimony Tree图2-3中，16SrRNA基因进化树显示，枯草芽孢杆菌VPLGZU-1与地衣芽孢杆菌DSM_1BCRC_11702 、Sonorensis 芽孢杆菌 NBRC_101234 等菌株有较近亲缘关系，相比之下，与枯草芽孢杆菌 BGSC_3A28 关系较远。但枯草芽孢杆菌 BGSC_3A28 与枯草芽孢杆菌 JCM_146

猪源大肠杆菌,敏感性试验

图 3-1. 遵义地区猪源大肠杆菌对氨苄西林的敏感性试验结果Fig.3-1. Results of Susceptibility Testing of Swine-derived E.coli toAmpicillin in Zunyi Area
【学位授予单位】：贵州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S852.61

【参考文献】