牛源多杀性巴氏杆菌转录组学分析及DnaJ蛋白表达与免疫原性分析

发布时间：2020-04-03 23:18

【摘要】：牛多杀性巴氏杆菌主要引起牛肺炎,在世界各地广泛流行和分布,影响着养牛业的发展。多杀性巴氏杆菌根据荚膜抗原可分为A、B、D、E和F型5个血清型。多杀性巴氏杆菌的毒力因子种类繁多,但对其致病机制及相关毒力因子的作用仍有待于进一步研究。本研究在确定牛荚膜A型多杀性巴氏杆菌的基础上,通过动物试验及部分多杀性巴氏杆菌毒力基因的扩增筛选出强毒株与弱毒株,并将强、弱毒株进行转录组测序分析。将差异表达基因进行分析,筛选毒力基因并富集到KEGG_-map上,综合分析多杀性巴氏杆菌的致病机制。1.牛源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定本研究采集疑似感染牛肺炎的病料进行细菌的分离,通过生化鉴定及多杀性巴氏杆菌特异性引物对分离菌株进行鉴定,共分离出12株多杀性巴氏杆菌,并采用PCR技术对12株多杀性巴氏杆菌进行荚膜血清型鉴定,结果表明12株菌株均为荚膜A型多杀性巴氏杆菌。2.基于强、弱毒株转录组学分析通过动物试验及多杀性巴氏杆菌部分毒力基因扩增筛选出强毒株与弱毒株,利用转录组学分析,从cDNA文库中筛选到72个差异表达的基因。显著性分析发现,在强、弱毒株中共有69个表达基因下调和3个表达基因上调。本次测序结果显示弱毒株与强毒株相比毒力基因Znua与Rope表达显著下调。3.DnaJ蛋白的提纯及功能验证在转录组学测序结果中弱毒株Dnaj表达下调最为显著。在本研究中,将Dnaj基因与pET-28a载体连接,构建重组质粒,并将重组质粒转入DE3细胞中,经IPTG诱导表达,获得大小约为37.8kDa的重组蛋白。通过亲和层析法(Ni-NAT)纯化DnaJ蛋白。将纯化的蛋白免疫小鼠,通过Western blot对DnaJ蛋白的免疫原性做出初步分析。
【图文】：

化试验结果图 1.1 染色结果A）革兰氏染色镜检结果（1 000×）（B）美兰染色镜检结果（1 000×）Fig.1.1 The dyeing resultsA）Gram staining result（1 000×）（B）Methylene blue staining result（1 0

浓度试验结果分析图 1.3 hyaD-hyac 基因扩增结果M: DL-2000 Marker; Pm-1—Pm-12:多杀性巴氏杆菌Fig.1.3 PCR amplification of hyaD-hyacM: DL-2000 Marker; Pm-1—Pm-12: Pasteurella multocida
【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S852.61

【参考文献】

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3 陈光宏;贺晓龙;;猪源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定与药敏试验[J];畜牧与兽医;2012年08期

4 刘万飞;王西亮;赵宇慧;曾p瑶;耿佳宁;胡松年;;基于第二代测序技术的细菌基因组与转录组研究策略简介[J];微生物学通报;2011年11期

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本文编号：2613829