高原鼢鼠对抗凝血杀鼠剂的抗性研究

发布时间：2020-04-07 17:04

【摘要】：高原鼢鼠(Eospalax baileyi)是分布于青藏高原的优势鼠种,近年来,在人类活动干扰及气候因素等影响下,局部地方种群密度高、数量大,危害突出。药物防治是现行控制高原鼢鼠的重要措施之一,如何避免由于杀鼠剂的长期使用导致的抗性种群发生等问题,建立有效的高原鼢鼠抗药性检测手段和方法,适时科学评估其抗药性的发生情况,对优化高原鼢鼠防控策略,合理治理高原鼢鼠抗性种群,维护草地生态系统平衡等均具有重要意义。本研究在综述啮齿动物抗药性产生的原因、行为、遗传等方面抗性产生的方式等基础上,测定了祁连山东缘高原鼢鼠对抗凝血灭鼠剂溴敌隆的敏感性与适口性水平,检测了青藏高原东缘8个地区高原鼢鼠VKORC1和CYP3A2基因外显子的核苷酸变异情况,测序鉴别其基因型,对比褐家鼠(Rattus norvegicus)和裸鼹鼠(Heterocephalus glaber)氨基酸序列并结合已知突变分析其抗药性。获得以下主要结论:1.连续喂食1、3、5、和7 d 0.0005%的溴敌隆毒饵后,高原鼢鼠毒饵取食量有下降趋势,不同性别高原鼢鼠对溴敌隆的敏感性无显著性差异(t= 1.232,P=0.329),其半致死喂食期(LFP50)和99%致死喂食期(LFP99)的估计值分别为0.492 d和11.897 d;高原鼢鼠取食毒饵后,死亡高峰期出现在第6~9 d。0.0005%溴敌隆对高原鼢鼠的首遇适口性为0.66,再遇适口性为0.77,均达到良好摄食系数,实验室校正灭鼠率均达100%。溴敌隆对祁连山东缘地区高原鼢鼠的毒效高、适口性好,所检测的高原鼢鼠岱乾种群无抗性发生。2.对青藏高原东缘8个地区高原鼢鼠VKORC1基因三个外显子的核苷酸变异情况检测发现:1129只高原鼢鼠个体中,有276只个体的VKORC1氨基酸序列与其野生型有差异。地理分布上,有5个种群的VKORC1基因检测出了所有基因型突变,共界定了4个基因型。高原鼢鼠VKORC1氨基酸存在4个错义突变位点,其中在4个高原鼢鼠种群中检测到了与抗药性相关的基因型氨基酸突变Phe63Cys。对比褐家鼠氨基酸序列,发现高原鼢鼠VKORC1氨基酸序列有18个错义突变位点。本研究初步检测了4个种群存有抗性,抗性个体(62)占所测样本的5.5%(n=1129),说明高原鼢鼠局部地区种群已出现抗性个体但尚未形成抗性种群。3.对青藏高原东缘8个地区高原鼢鼠CYP3A2基因进行两个外显子的核苷酸变异情况检测发现,870只高原鼢鼠个体中,有381只个体的CYP3A2氨基酸序列与其野生型有差异。地理分布上,所有地理种群的CYP3A2基因均检测出了突变,共界定了6个基因型,高原鼢鼠CYP3A2种内存在8个氨基酸错义突变位点,对比褐家鼠氨基酸序列,发现高原鼢鼠CYP3A2基因序列有11个错义突变位点,表明CYP3A2基因介导的细胞色素还原氧化酶的改变使高原鼢鼠对抗凝血剂类药物有不同的代谢程度,可作为进一步验证抗性情况的候选标记。
【图文】：

到高原鼢鼠三个外显子基因序列，第一外显子为 147 bp，，第二外显子为 106 bp，第三外显子为 157 bp（图 3.1）。所得到合适的高原鼢鼠 VKORC1 外显子使用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳进行检测，得到了高原鼢鼠3个外显子的SNP（图3.2）。

图 3.1 高原鼢鼠外显子 PCR 产物琼脂糖凝胶电泳结果注：A，B，C 分别为 VKORC 基因的外显子 1，2 和 3。M 为 DNAmarker 2000Fig 3.1Agarose gel electrophoresis results of exon PCR products in Plateau zokorNote：A, B, and C are exons 1, 2, and 3 of the VKORC gene, respectively. M Is DNAMarker2000图 3.2 高原鼢鼠三个外显子聚丙烯酰胺凝胶电泳 SNP 结果Fig 3.2 SNP results of polyacrylamide gel electrophoresis in three exons of Plateau zokor3.3.2 VKORC1 基因外显子多态性 SNP 分析在全部 1129 个高原鼢鼠样本的 VKORC1 基因外显子多态性结合测序图谱分Vkorc1 Exon1BB BB BB BC ACVkorc1 Exon3AB BB BB BB BB BCVkorc1 Exon2AB AB AB BB AB
【学位授予单位】：甘肃农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S812.6

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本文编号：2618159