益生屎肠球菌的细胞壁脂磷壁酸提取和纯化条件的研究
发布时间：2020-04-16 12:45
【摘要】：本研究的目的是确定屎肠球菌EF1细胞壁脂磷壁酸提取和纯化的适宜条件,为获取高纯度且质量稳定的脂磷壁酸提供切实可行的方法。采用活菌计数法研究屎肠球菌EF1的生长规律;用离心法收集细菌细胞研究细菌生物量;用水饱和正丁醇提取脂磷壁酸,研究细胞破壁时间和正丁醇萃取时间对提取物得率的影响;研究疏水作用层析和离子交换作用层析对脂磷壁酸的纯化效果,为日后获取高纯度且质量稳定的脂磷壁酸用于机理研究奠定基础。主要研究结果如下:(1)屎肠球菌EF1在MRS培养基37℃静止培养24 h达到对数生长末期,36 h之后进入稳定期。在对数生长末期的生物量最高,为3.22 g/L,比稳定期增加22.43%(P0.01)。细菌离心15 min得到的生物量比12 min提高12.20%(P0.05)。(2)细胞破壁70 min和正丁醇提取60 min的屎肠球菌EF1的脂磷壁酸得率最高,为2.27%(P0.01)。(3)屎肠球菌EF1的脂磷壁酸粗提物用辛基琼脂糖凝胶层析时,用35%正丙醇乙酸钠缓冲液洗脱脂磷壁酸比用15-60%线性梯度洗脱效果更好。DEAE离子交换层析对脂磷壁酸的进一步纯化效果不明显。结论:屎肠球菌EF1宜在对数生长末期收获,离心15 min收集细胞。细胞破壁时间和正丁醇提取时间对该菌株的脂磷壁酸提取得率有显著交互效应。脂磷壁酸粗提物用辛基琼脂糖凝胶层析时,适宜采用等度洗脱,不必要再进行DEAE离子交换层析。
【图文】：
广西大学硕士学位论文益生屎月务球菌的细胞壁月旨y壁酸提取和匕条件的研究逡逑乙酰氨基葡萄糖和Ｎ－乙酰胞壁酸交替单元组成［３］。革兰氏阳性菌细胞壁的肽聚糖逡逑一共有４０－８０层，厚度约２０－８０邋ｎｍ，占细胞干重的９０％左右［４＿５］。细胞壁这些厚逡逑厚的肽聚糖层不仅决定了细菌细胞壁的强度，而且还稳定细胞膜，维持细胞的逡逑特定形状［３］。磷壁酸是革兰氏阳性菌细胞壁特有的成分（革兰氏阴性菌没有该成逡逑分），占肽聚糖层的２０－４０％，能够增强细胞壁的韧性［６＿７１，在决定细胞形状、完逡逑整性、调节细胞分裂以及生存能力方面都起重要的作用［８＿９］。磷壁酸的特性见下逡逑文（１．１．２）。相对革兰氏阳性菌而言，革兰氏阴性菌的细胞壁较薄，层肽聚糖仅逡逑有数层，厚度５－１０邋ｎｍ，只占细胞干重的１０％左右。但是结构却更复杂，除了肽逡逑聚糖层外，还有油脂蛋白、脂质双层和脂多糖构成的外膜结构（如图１．２所示）逡逑Ｐ，３，５］逡逑0逡逑Ｇｒ；ｎｎ邋（＋）邋（邋ｅｌｌ－Ｗｉｉｌｌ逦Ｇｉ邋ａｍ邋（－）邋ｃｅＩｌ－＞ＶｉＵｌ逡逑
１．２．２．１生物大分子的标准纯化流程［}卞义弦桓霰曜嫉纳锎蠓肿哟炕鞒贪ㄑ返牟痘瘛⒅卸却炕途复炕鲥义辖锥危ㄈ缤迹保邓荆５牵馊龃炕锥尾⒉皇蔷远懒⒒蛘弑夭豢缮俚摹ｅ义显谑导视τ弥校３＝痘窠锥魏椭卸却炕锥魏隙唬绱酉赴嘌锨逯绣义戏掷氪炕∈蟮タ寺】固宓模桑纾牵切停ú捎们缀筒阄龌蛘呃胱咏换徊阄霾痘癜绣义系鞍缀螅恍枰屑浯炕蛭捎酶哐≡裥缘牟痘穹椒ǹ梢酝比コ罅康脑渝义现实鞍字屎偷头肿恿康脑又剩锏礁咝У拇炕Ч＃６杂谀承┤菀追掷氲腻义涎罚恍柚葱幸徊酱炕僮骷茨艽锏侥勘攴肿拥闹票敢螅绱哟蟪Ω司赴义夏ぶ蟹掷氪炕さ鞍祝榘彼岜昙堑南赴匮趸福ㄖ恍柩≡袷实钡娜ノ奂梁湾义细哐≡裥缘纳捉橹剩捎们缀蜕准纯筛呋厥章实夭痘衲さ鞍祝⑶彝被鼓苠义瞎蝗コ又实鞍字省ⅲ模危痢⒗嘀偷头肿恿吭又剩锏讲芬蟮淖愎坏拇慷龋ｅ义弦虼
本文编号：2629747
【图文】：
广西大学硕士学位论文益生屎月务球菌的细胞壁月旨y壁酸提取和匕条件的研究逡逑乙酰氨基葡萄糖和Ｎ－乙酰胞壁酸交替单元组成［３］。革兰氏阳性菌细胞壁的肽聚糖逡逑一共有４０－８０层，厚度约２０－８０邋ｎｍ，占细胞干重的９０％左右［４＿５］。细胞壁这些厚逡逑厚的肽聚糖层不仅决定了细菌细胞壁的强度，而且还稳定细胞膜，维持细胞的逡逑特定形状［３］。磷壁酸是革兰氏阳性菌细胞壁特有的成分（革兰氏阴性菌没有该成逡逑分），占肽聚糖层的２０－４０％，能够增强细胞壁的韧性［６＿７１，在决定细胞形状、完逡逑整性、调节细胞分裂以及生存能力方面都起重要的作用［８＿９］。磷壁酸的特性见下逡逑文（１．１．２）。相对革兰氏阳性菌而言，革兰氏阴性菌的细胞壁较薄，层肽聚糖仅逡逑有数层，厚度５－１０邋ｎｍ，只占细胞干重的１０％左右。但是结构却更复杂，除了肽逡逑聚糖层外，还有油脂蛋白、脂质双层和脂多糖构成的外膜结构（如图１．２所示）逡逑Ｐ，３，５］逡逑0逡逑Ｇｒ；ｎｎ邋（＋）邋（邋ｅｌｌ－Ｗｉｉｌｌ逦Ｇｉ邋ａｍ邋（－）邋ｃｅＩｌ－＞ＶｉＵｌ逡逑
１．２．２．１生物大分子的标准纯化流程［}卞义弦桓霰曜嫉纳锎蠓肿哟炕鞒贪ㄑ返牟痘瘛⒅卸却炕途复炕鲥义辖锥危ㄈ缤迹保邓荆５牵馊龃炕锥尾⒉皇蔷远懒⒒蛘弑夭豢缮俚摹ｅ义显谑导视τ弥校３＝痘窠锥魏椭卸却炕锥魏隙唬绱酉赴嘌锨逯绣义戏掷氪炕∈蟮タ寺】固宓模桑纾牵切停ú捎们缀筒阄龌蛘呃胱咏换徊阄霾痘癜绣义系鞍缀螅恍枰屑浯炕蛭捎酶哐≡裥缘牟痘穹椒ǹ梢酝比コ罅康脑渝义现实鞍字屎偷头肿恿康脑又剩锏礁咝У拇炕Ч＃６杂谀承┤菀追掷氲腻义涎罚恍柚葱幸徊酱炕僮骷茨艽锏侥勘攴肿拥闹票敢螅绱哟蟪Ω司赴义夏ぶ蟹掷氪炕さ鞍祝榘彼岜昙堑南赴匮趸福ㄖ恍柩≡袷实钡娜ノ奂梁湾义细哐≡裥缘纳捉橹剩捎们缀蜕准纯筛呋厥章实夭痘衲さ鞍祝⑶彝被鼓苠义瞎蝗コ又实鞍字省ⅲ模危痢⒗嘀偷头肿恿吭又剩锏讲芬蟮淖愎坏拇慷龋ｅ义弦虼
本文编号：2629747
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/2629747.html
