捻转血矛线虫Hc-daf-12基因结构和功能的研究

发布时间：2020-04-20 12:24

【摘要】：捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)是广泛寄生于牛羊等反刍动物真胃的常见寄生性线虫,因成虫吸食宿主血液而引起动物尤其是羔羊的贫血、衰弱、生长迟缓甚至死亡,给畜牧业造成了重大的经济损失。目前,捻转血矛线虫的防治主要是靠化学药物驱虫。然而,化学药物的滥用不仅导致抗药虫株的出现,并且由于药物残留也给环境造成不同程度的污染。因此,寻找一种有效且对环境无害的防治捻转血矛线虫新方法是十分必要的。研究发现,寄生线虫的自由生活阶段与自由生活的秀丽隐杆线虫的dauer(滞育)阶段无论在形态、发育和行为方面都极为相似。秀丽隐杆线虫的dauer阶段是由四个信号通路进行调控的,其中核受体信号通路在最下游进行调控,DAF-12是该信号通路极其关键的基因,且调控虫体的生长发育。本课题通过生物信息学分析、免疫组化及RNA干扰等技术对捻转血矛线虫Hc-daf-12基因结构和功能进行了研究。本实验首先确定了捻转血矛线虫Hc-daf-12基因的c DNA、g DNA、氨基酸及上游启动子序列。并且发现Hc-daf-12与daf-12家族基因高度同源,且具有共同保守的结构域Ligand Binding Domain和DNA Binding Domain。经过生物信息学分析发现Hc-daf-12在捻转血矛线虫中的各个阶段都可以转录且在L3期转录水平最高。通过原核表达Hc-daf-12的截短蛋白Hc-DAF-12-LBD,并用纯化到的高特异性的蛋白免疫兔子获得多克隆抗体,用多抗定位到该基因在捻转血矛线虫肠道表达。最后成功用RNAi的方法研究了Hc-daf-12基因的功能,证明其在捻转血矛线虫的生长和发育中发挥重要的作用。综上所述,本课题获得了捻转血矛线虫Hc-daf-12基因,并对该基因的结构和功能进行了研究,为探索捻转血矛线虫L3期滞育机制及后续为开发药物靶标提供理论依据。
【图文】：

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图 1-1 捻转血矛线虫的生活史示意图Fig. 1-1 Life cycle of Haemonchus contortus（Jones，，2011）捻转血矛线虫病的流行病学ontortus 成虫的寿命大约为一年。雌虫每天可产卵 5000~10000 个。因带鞘，对外界环境抵抗力较强，因此在一般草场上可存活约 3~4 个干燥的环境中，进入休眠状态后寿命会达到一年半的时间。该时期的光性和背地性，在湿度、光照和温度适合时，从泥土爬到草上；当环

捻转血矛线虫,临床症状

图 1-2 捻转血矛线虫感染羊的临床症状Fig. 1-2 Clinical symptoms of sheep infected with Haemonchus contortus（Gasser et al 2008）1.1.5 捻转血矛线虫病的诊断及防治通过结合临床症状和当地的流行病学对捻转血矛线虫病进行初步的诊断。便捷的方法是用饱和食盐水漂浮法检测粪便中的虫卵。但因为虫卵的特征性不是很强，所以需进行幼虫的培养来进一步鉴别，对三期幼虫进行鉴定。利用核糖体DNA 第二转录间隔区（ITS-2）可以进行分子鉴定。病畜死后可进行剖检，在尸体的真胃或小肠中找到成虫即可确诊（杨光友 2017；李国清 2006）。对于该病的预防：首先可以适时的进行预防性的驱虫，此可根据当地流行病学资料做出详细规划。一般情况春秋各进行一次驱虫，即在放牧前和放牧后；注意饮水和放牧的卫生；禁止饮用低洼地区的死水和积水，饮用干净的井水和流水；有规划地实行轮牧；加强适宜的饲养管理，合理的补充精料，从而增加畜体的抗
【学位授予单位】：华中农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S852.731

【参考文献】