蓝舌病病毒抗体检测竞争ELISA方法的建立及应用

发布时间：2020-04-23 05:55

【摘要】：蓝舌病病毒(Bluetongue virus,BTV)引起家养或野生的反刍动物发生蓝舌病(Bluetongue,BT)。该病是由库蠓等昆虫媒介传播的,是一种典型的非接触性病毒性传染病。目前,这一疾病是OIE划定的通报类疫病之一,我国己将其规定为一类动物传染病。蓝舌病病毒属于呼肠孤病毒科环状病毒属,BTV粒子为二十面立体对称,圆形,无囊膜,直径约53~60 nm,呈现中空的短圆柱状。核心部分是由10个线性双链RNA所组成。BTV外壳主要由VP2和VP5构成,VP2是BTV型特异性抗原。病毒内壳即核心衣壳主要由VP3和VP7构成。VP7在核衣壳内主要是以三聚体的形式存在,是BTV群特异性抗原。BT有26个血清型,且各血清型之间无交叉保护作用。制备具有群特异性阻断效果的自主研发ELISA检测试剂盒,为我国的流行病学调查和监测提供快速、安全及有效的技术手段势在必行。将已构建好的表达8型蓝舌病病毒VP7蛋白的重组大肠杆菌pET28a-8S7/BL21菌种进行IPTG诱导表达后,利用树脂对该蛋白进行纯化,间接ELISA结果表明该蛋白能够与蓝舌病病毒24个型的标准阳性血清发生特异性反应,表明表达的8型蓝舌病病毒VP7蛋白具有良好的群特异性反应原性。以VP7蛋白作为包被抗原、抗8型蓝舌病病毒VP7蛋白的单克隆抗体6D11作为竞争抗体,建立了检测BTV的竞争性ELISA检测方法,并通过特异性实验,符合率实验、重复性实验、敏感性分析、保存期实验验证该检测方法。利用本研究建立的C-ELISA检测方法与商品化的蓝舌病抗体ELISA检测试剂盒相比较,同时检测本实验室保存的不同地区的山羊、绵羊及牛的172份血清样本,样品检测结果符合率达98.84%,说明该方法可以用于BT的流行病学调查和监测工作,该方法的建立为我国BT血清学监测提供了安全、快速、准确的技术手段。
【图文】：

SDS-PAGE鉴定VP7蛋白纯化

Western blot 鉴定 VP7 蛋白city of VP7 protein was iden定V1-24 阳性血清对 VP7 蛋白兔抗绵羊 IgG 1∶3000 稀 蛋白抗原性较好且具有群
【学位授予单位】：东北农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S852.4

【参考文献】

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本文编号：2637425