AA-CYP表氧化酶代谢产物对胰岛β细胞增殖和胰岛素分泌的影响及其机制的研究

发布时间：2020-04-26 18:36

【摘要】：花生四烯酸(Arachidonic acid,AA)经过细胞色素 P450(Cytochrome P450,CYP)表氧化酶途径生成环氧二十碳三烯酸(Epoxyeicosatrienoic acids,EETs)及20-羟基二十碳四烯酸(20-HETE)。细胞的生长和分化、调节体温及血压等重要的生理作用均有这些代谢产物参与及发挥作用。此外,这些代谢产物在糖尿病等一系列人类重大疾病中,也发挥着相当重要的作用。随着人们对AA及其代谢产物的深入探索,在胰岛β细胞的功能及胰岛素抵抗中,AA及其代谢产物的作用受到了更多的关注和重视。本研究旨在分析AA细胞色素P450表氧化酶代谢产物EETs和20-HETE对胰岛β细胞增殖和胰岛素分泌的影响及其机制,为防治2型糖尿病提供理论依据。本研究以体外培养的胰岛β细胞为研究对象,经过细胞培养、传代和活细胞计数后,用不同浓度EETs和20-HETE处理胰岛β细胞,在培养到12h、24h和48h时,用CCK-8法检测EETs和20-HETE/EETs对胰岛β细胞增殖的影响;western blot检测EETs和20-HETE/EETs对胰岛(3细胞增殖影响的机制;ELISA检测EETs和20-HETE/EETs对胰岛β细胞分泌胰岛素的影响和机制。结果显示:(1)在12h和24h时,浓度为100nM的14,15-EET对胰岛β细胞增殖具有显著促进作用,其中12h时为差异最明显,而其他浓度的EETs和20-HETE的差异不显著。在48h时,各组之间均没有明显差异性。(2)EETs处理组PI3K表达水平显著上升,当20-HETE/EETs联合处理时,PI3K表达水平显著降低;抑制剂处理组显著阻止了 PI3K表达水平,但磷酸化AKT表达水平有较显著增加;PI3K蛋白表达量在11,12-EET和14,15-EET中均无明显差异。(3)在12h、24h和48h时,11,12-EET和14,15-EET均极显著的增强了胰岛β细胞分泌胰岛素的能力,且在48h时最为显著。其中,11,12-EET的作用略占优势。1:1020-HETE/11,12EET组在12h时对胰岛β细胞分泌胰岛素能力有显著影响,但在24h和48 h时不显著。而20-HETE/14,15EET组在三个时间段均无显著影响。(4)在12h和24h时,11,12-EET组和14,15-EET组的胰岛素含量明显增加,20-HETE/11,12-EET组和20-HETE/14,15-EET组的胰岛素含量无显著增加。分别将11,12-EET和14,15-EET组与相对应的抑制剂组作比较,差异均显著。在48h时,11,12-EET 组、14,15-EET 组、20-HETE/11,12-EET 组和 20-HETE/14,15-EET 组的胰岛素含量均有显著增加。分别将11,12-EET、14,15-EET组、20-HETE/11,12-EET组和20-HETE/14,15-EET组与相对应的抑制剂组作比较,差异均显著。本研究表明,浓度为100nM的14,15-EET呈时间依赖性促进胰岛β细胞的增殖;11,12-EET和20-HETE/EET在促进胰岛β细胞增殖的过程中没有显著作用。11,12-EET和14,15-EET均极显著地增强了胰岛β细胞分泌胰岛素的能力。其中,11,12-EET的作用略占优势。20-HETE/EET对胰岛β细胞分泌胰岛素的能力没有显著的影响。11,12-EET和14,15-EET可能是通过PI3K信号转导通路促进胰岛β细胞胰岛素分泌能力。这些说明11,12-EET和14,15-EET在胰岛β细胞增殖和胰岛素分泌的过程中发挥着重要的作用。
【图文】：

内蒙古农业大学硕士学位论文逦９—逡逑细胞的影响均不显著，说明溶剂对胰岛Ｐ细胞无影响。与空白组相比较，在逡逑和２４ｈ时，，浓度为ｌＯＯｎＭ的１４，１５－ＥＥＴ对胰岛ｐ细胞的增殖具有显著促进作逡逑＜０．０１），其中１２ｈ时为差异最大，而其他组的差异不显著。在４８ｈ时，各组逡逑没有明显差异性。随着细胞培养时间的推移，１００邋ｎＭ邋１４，１５－ＥＥＴ组的ＣＣＫ－８逡逑活性有下降趋势，其他组则没有显著差异。逡逑１２ｈ逡逑

卜时OC民~8相对活性FigZCCK-吕代加dy.朋tivityat24h
【学位授予单位】：内蒙古农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S852.2

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本文编号：2641774