皖东牛皮肤成纤维细胞体外培养建系及生长特性鉴定

发布时间：2020-04-30 05:55

【摘要】：目前,包括细胞培养在内的细胞工程技术已成为畜禽遗传资源活体保护强有力的辅助手段。皖东牛是新发现的国家级地方黄牛资源,适应性强、肉用性能佳,但现存群体数量较少,亟待保护。本试验采用组织块贴壁法对两头皖东牛种公牛皮肤成纤维细胞进行建系与生长特性鉴定,尝试了从冷冻精液中分离体细胞,旨在为建立皖东牛细胞库,丰富皖东牛种质资源保护手段奠定基础。取得主要结果如下:(1)培养细胞形态为长梭形成纤维状,生长曲线呈“S”型,符合成纤维细胞体外培养规律;(2)皖东牛34115053(后文简称为A)冻存前和复苏后第二代(Passge 2,简称P2)细胞平均活率分别为99.75%、91.82%,皖东牛34114125(后文简称为B)(P2)分别为97.88%、92.90%,表明该细胞可适应常规冻存;(3)对A(P5)、B(P11)成纤维细胞各70个分裂相的染色体分析,2N=60比重为91.43%(64/70)、82.86%(58/70),可稳定遗传;(4)添加15%的Gibco胎牛血清时,细胞增殖速率优于15%四季青胎牛血清组,而与10%的Gibco血清组相近,表明10%的Gibco血清浓度更适用;(5)A(P2、P5、P8)和B(P3、P6、P9)不同代次间,细胞生长状态和倍增时间无明显差异,为体细胞克隆选择最佳供体细胞代次奠定基础。成功建立了两头皖东牛种公牛成纤维细胞系,可作为皖东牛遗传资源保护的材料,为建立皖东牛细胞库奠定了坚实的基础。
【图文】：

皖东,母牛,公牛

图 1- 1 皖东牛公牛（左上）；皖东牛母牛（右上）；皖东牛母牛群（左下）Fig1 Wandong bull (top left ), Wandong cow (top right) and Wandong cows (bottom left )2.3 皖东牛遗传资源保护现状2011 年底，皖东牛存栏量在 7000 头左右，其中凤阳县饲养量最大，达 1530 头远县次之，为 1480 头[9]，总存栏量不足上世纪 90 年代皖东牛存栏量的 1/10。尤其指出的是，近年来在对皖东牛进行遗传资源调查时发现，皖东牛数量仍处于骤减的总存栏量仅维持在 3000 头左右，形势并不乐观。皖东牛的饲养多为散户饲养模式，不科学的饲养管理手段无法满足皖东牛正常需求，也无法繁育出优秀的牛只，不能保证高品质牛肉的获得；其次，在农耕机械役用牛只的时代，大多数养殖户将役用牛只变卖、屠宰，品种保护意识薄弱；此外为人们对皖东牛的特性认识不全面，试图引进外来品种替代或盲目杂交改良来提高效益，，这也导致皖东牛数量的大幅降低[63]。为此，安徽省政府针对皖东和其他畜禽的情况采取相应补救措施，加大畜禽保护的经济投入，开展“资源保护利用 9动”[11]，编制了《皖东牛地方标准(草案)》、《皖东牛保种方案》及《皖东牛遗传资

原代培养,细胞,成纤维细胞

2 结果2.1 成纤维细胞形态学观察原代培养后，第五天（图 2-1）可见少量细胞沿组织块外周贴附迁出，空白处许细胞贴附于皿底，细胞主要聚集在培养皿边缘，多为短小、纤细的三角形状态。养时间增加，细胞数量增多，沿组织块向外伸展，呈放射样或漩涡样生长晕（图细胞立体饱满，为典型的纺锤形形态，向外延伸 2-4 个突起，20×10 倍镜下可观察质中央的圆形细胞核。除成纤维细胞外，组织块周围也有呈多边形紧密排列的上皮（图 2-3），上皮细胞和成纤维细胞间有明显的细胞界限。在培养 10-11 d，可进行或冻存。
【学位授予单位】：安徽农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S823

【参考文献】