布鲁氏菌S2弱毒疫苗免疫抗体iELISA检测方法研究

发布时间：2020-04-30 10:30

【摘要】：布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的一种慢性人畜共患传染病,呈全球性流行,该病既给畜牧养殖业带来巨大经济损失,也给人的生命安全带来了威胁。现有的布鲁氏菌病诊断方法不能鉴别自然感染和疫苗免疫,相关研究具有重要意义。本研究从布鲁氏菌S2疫苗全基因组序列中筛选出特有的、具有免疫原性的3个候选抗原基因并对其进行生物信息学分析、重组表达和免疫原性鉴定;用重组蛋白S2RP2、S2RP3作为抗原,建立了羊种布鲁氏菌感染与S2疫苗免疫感染的鉴别诊断方法,主要研究结果如下:(1)布鲁氏菌S2疫苗S2JY1、S2JY2、S2JY3基因编码产物均为非跨膜蛋白、无信号肽的亲水性蛋白;S2JY1、S2JY3编码产物为稳定蛋白,S2JY2编码产物为不稳定蛋白;3个基因的编码蛋白分别有7、19、15个抗原表位。(2)经过SDS凝胶电泳检测,重组表达菌BL21(S2JY2)和BL21(S2JY3)均主要以包涵体的形式表达,重组表达菌BL21(S2JY1)的表达量较低;用Ni+柱对重组蛋白S2RP2、S2RP3进行了纯化,获得了较高纯度的重组蛋白。(3)经Western-Blot检测,重组蛋白S2RP2和S2RP3均与S2疫苗免疫血清反应,不与羊自然感染血清反应,具有较高的特异性和免疫原性。(4)以重组蛋白S2RP2、S2RP3作为抗原,建立了布鲁氏菌iELISA鉴别诊断方法。重组抗原S2RP2、S2RP3的敏感性和特异性均达到95%以上,2种检测抗原阳性检出率间无显著差异(P≥0.05),说明重组抗原S2RP2和S2RP3均可用于布鲁氏菌S2疫苗免疫抗体的检测。
【图文】：

GYQMSETTRNMRRG（125～138），Y（140），LIEITHEDLRALT（153～165），G(172),KVENPADLVRPSTIAKFEPRDRALTPEEIGL （ 197 ～ 227 ），， MKRRNPHLV（280～288），S（308），DLPMSS（319～324）， QKEGQSLGKFG（339～349），TDWIEKCLAHEQKGVRAVYNKAEYRDQRRAML（368～399），MIDEWTIRKIRPKI（405～417）。2.2.1.3 蛋白跨膜区和信号肽预测应用 TMHMM 预测跨膜区，结果图 1、图 2、图 3 所示；利用 Signal P 软件预测该蛋白的信号肽，结果图 4、图 5、图 6 所示。S2JY1 Length: 145S2JY1 Number of predicted TMHs: 0S2JY1 Exp number of AAs in TMHs: 0.20874S2JY1 Exp number, first 60 AAs: 0.18349S2JY1 Total prob of N-in: 0.05987S2JY1 TMHMM2.0 outside 1 145

S2JY1 Number of predicted TMHs: 0S2JY1 Exp number of AAs in TMHs: 0.20874S2JY1 Exp number, first 60 AAs: 0.18349S2JY1 Total prob of N-in: 0.05987S2JY1 TMHMM2.0 outside 1 145图 1 S2JY1 蛋白跨膜结构预测Fig.1 The transmembarne domain analysis of S2JY1S2JY2 Length: 519S2JY2 Number of predicted TMHs: 0S2JY2 Exp number of AAs in TMHs: 0.00039S2JY2 Exp number, first 60 AAs: 0.00018S2JY2 Total prob of N-in: 0.00069S2JY2 TMHMM2.0 outside 1 519
【学位授予单位】：内蒙古农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S852.4

【参考文献】

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本文编号：2645673