马驴高效扩繁技术研究及应用

发布时间：2020-05-07 07:26

【摘要】：实现马驴高效扩繁在生产、动物保护等方面具有重要意义。在马方面,论文研究了褪黑素、钙离子抑制剂BAPTA-AM在马精液低温保存中的作用,外源药物对马排卵、情期的影响;在驴方面,研究筛选出适宜驴精液体外低温保存的稀释液和冷冻液,并对公驴精液质量影响因素、母驴情期生理特性,外源药物对母驴排卵、同期发情效果进行了探讨。研究发现:在马方面,褪黑素和BAPTA-AM对马低温保存精子保护呈浓度依赖性。马精液冷冻稀释液中加入1mM褪黑素可保护精子线粒体膜电位和提高DNA完整性,增加解冻后冻精ATP含量,减少BimEL ROS和MDA水平,延长精子4 ℃保存存活时间,提高冻精的受孕率;添加50μMBAPTA-AM的冷冻液可提高精子活力,增加解冻精子ATP,MMP,ROS和MDA含量,但未提高4℃保存48h精子输精受孕率。马匹排卵后7d后,分别连续两天肌肉注射PG,PGF2α,PG+PGF2α或PGF2α+PG可使排卵周期缩短为18±2d,17±2d,14±2d,15±2d。重复使用hCG超4次使注射与排卵发生的时间间隔延长。GnRH类似物对母马超排,输精后平均每3.3个卵泡可回收1.6个胚胎。在驴方面,德州驴体高和采精量显著正相关;体长、阴囊周径、管围、尻长与总精子数显著正相关;爬跨、唇裂嗅次数、勃起时间、交配时间与精子总量不相关;采精量与密度负相关。公驴采精量、精子活力和冻后活力受年龄、季节影响。SM3稀释液4 ℃保存驴精液活力较其他SM组高,且SM3液稀释处理的6亿精子低温保存96h的输精情期受孕率与鲜精无差异;5%DMF添加到SM3液中可显著提高冻精活率;同时发现,冻精50 ℃解冻12-16s活率较35 ℃、36s高,冻精输精情期受胎率与鲜精无统计学差异。德州驴黄体平均持续期为14.0±4.8d。情期平均有两个卵泡波存在,第一个卵泡募集发生于排卵后5.2±1.9d,持续约8.0±4.0d,直到黄体消融前,但未发育成优势卵泡;优势卵泡出现在排卵后16.5±1.0d,卵泡优势化后距排卵时间约6.2±1.3d,即上一次排卵后的20.0±5.2d。分析情期血液激素变化后发现,发情前期(18-21d)母驴E2浓度逐渐升高,并在排卵前3天维持高水平,间情期7-17d和排卵后4-6d 的E2浓度较低。FSH浓度在间情期最高,发情后期略低于发情期。P4浓度在排卵后逐渐升高,并在7-9d达到高峰,之后逐渐下降。LH浓度在优势卵泡出现后逐渐升高,并在排卵前2天达到峰值。母驴发情和卵泡发育受体内激素影响,检测体温和阴道电阻值不能有效鉴定其发情状态。排卵5-8d的母驴肌肉注射5,1OmgPGF2α和0.4mgPG后9-11d的排卵率分别为36.5%、88.8%和63.5%,情期排卵间隔分别为22.58±5.72d、18.11±1.92d 和 19.13±3.38d。德州驴自然排卵平均直径为38.8±5.1mm,卵泡直径大于30mm的母驴注射GnRH类似物后48h或25-48h的排卵率明显高于hCG组和对照组,但无排卵个数差异。于此同时,母驴群第0天注射GnRH类似物,第2天塞入孕酮栓,第7天肌肉注射PG,第9天再次注射PG、撤栓,可使85.69%的驴群在第10-14天内发情。
【图文】：

褪黑素,精子

３．结果逡逑３．１褪黑素对马精液保存影响逡逑如图１－１，１－２所示，，总活力和直线前进精子数随着体外保存时间的延长而呈现逡逑下降的趋势。同时发现，０．００１、０．１００、１．０００和ｌＯ．ＯＯＯｍＭ褪黑素组精子总活力和逡逑直线前进精子体外保存４８ｈ后，比对照组和Ｏ．ＯＯｌｍＭ组高（；７＜０．仍），但０．００１、逡逑０．０１０、１．０００和１０．００0１１＾组间无统计学差异。精子４°（：体外保存大于４８１１后，１．００0１１＾逡逑褪黑素添加组显示出最高的总精子活力和直线前进数。逡逑１２０邋；逡逑Ｃｏｎｔｒｏｌ逦０．００１邋ｍＭ逦０．０１０邋ｍＭ邋０．１００邋ｍＭ邋１．０００邋ｍＭ邋１０．０００邋ｍＭ逡逑■邋１００邋Ａ；ｇ邋．逦Ａ：６逦ｆ逦Ａ；ｇ逦Ａ；ｇ逦Ａ；ｇ逡逑ＩｓｏＶ逦＼逦％逦％逦％逦＼逡逑１邋！邋ｔ邋＾邋Ｖ邋＼邋Ｖ邋ｔ逡逑＾邋Ｏ邋ｒ＞ｌ邋＊９邋ｉＣ邋ｒ＞ｌ邋＾邋0邋0邋？Ｓ邋ＳＣ邋ＪＳ邋Ｑ邋Ｃ邋ｆｓ？邋－５０邋Ｏ邋0邋0逦ａ？邋ｐｇ邋Ｕ５邋0逡逑５－ｉＰ４？ｒｒ＾ｓ？ｉｒ＊逡逑ｒ－？逡逑Ｔｉｍｅ邋（ｈ）逡逑图１－１不同浓度褪黑素对４°Ｃ保存不同时间马精子总活力的影响逡逑图注：ＴＭ代表总活力、总运动精子的百分比；同一组和相同时间内的不同上标表示ＳＮＫ检验的统计学显逡逑着性（／？逦相同组、不同时间，Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ；同一时间、不同组

褪黑素,精子,活力

３．结果逡逑３．１褪黑素对马精液保存影响逡逑如图１－１，１－２所示，总活力和直线前进精子数随着体外保存时间的延长而呈现逡逑下降的趋势。同时发现，０．００１、０．１００、１．０００和ｌＯ．ＯＯＯｍＭ褪黑素组精子总活力和逡逑直线前进精子体外保存４８ｈ后，比对照组和Ｏ．ＯＯｌｍＭ组高（；７＜０．仍），但０．００１、逡逑０．０１０、１．０００和１０．００0１１＾组间无统计学差异。精子４°（：体外保存大于４８１１后，１．００0１１＾逡逑褪黑素添加组显示出最高的总精子活力和直线前进数。逡逑１２０邋；逡逑Ｃｏｎｔｒｏｌ逦０．００１邋ｍＭ逦０．０１０邋ｍＭ邋０．１００邋ｍＭ邋１．０００邋ｍＭ邋１０．０００邋ｍＭ逡逑■邋１００邋Ａ；ｇ邋．逦Ａ：６逦ｆ逦Ａ；ｇ逦Ａ；ｇ逦Ａ；ｇ逡逑ＩｓｏＶ逦＼逦％逦％逦％逦＼逡逑１邋！邋ｔ邋＾邋Ｖ邋＼邋Ｖ邋ｔ逡逑＾邋Ｏ邋ｒ＞ｌ邋＊９邋ｉＣ邋ｒ＞ｌ邋＾邋0邋0邋？Ｓ邋ＳＣ邋ＪＳ邋Ｑ邋Ｃ邋ｆｓ？邋－５０邋Ｏ邋0邋0逦ａ？邋ｐｇ邋Ｕ５邋0逡逑５－ｉＰ４？ｒｒ＾ｓ？ｉｒ＊逡逑ｒ－？逡逑Ｔｉｍｅ邋（ｈ）逡逑图１－１不同浓度褪黑素对４°Ｃ保存不同时间马精子总活力的影响逡逑图注：ＴＭ代表总活力、总运动精子的百分比；同一组和相同时间内的不同上标表示ＳＮＫ检验的统计学显逡逑着性（／？逦相同组、不同时间，Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ；同一时间、不同组
【学位授予单位】：中国农业大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S814

【参考文献】