猫传染性鼻结膜炎灭活疫苗的制备及评价

发布时间：2020-05-24 01:45

【摘要】：猫杯状病毒(Feline calicivirus,FCV)隶属于杯状病毒科、水疱疹病毒属,是一种引起猫科动物口腔与上呼吸道疾病的重要病原。FCV感染后临床症状主要表现为口腔溃疡、慢性口炎、鼻炎、结膜炎、肺炎等,也会引发溃疡性皮炎、急性关节炎、肠炎、流产以及跛行等临床症状。该病发病率较高,死亡率低,但部分毒株感染后死亡率也可达到30%以上。FCV呈世界性分布,在猫科动物中具有高度传染性,主要感染6~84日龄的幼猫。幼猫感染后,在口腔与上呼吸道增殖,引发上呼吸道炎症,感染后14~18 d临床症状减轻,但仍可通过唾液、鼻眼分泌物持续排毒,成为危险的传染源。由于FCV常与猫疱疹病毒1型、猫细小病毒混合感染,给该病的预防及治疗造成了困难。目前该病预防仍以疫苗注射为主,但国内尚无获得临床批件的自主研发疫苗,仍需依赖进口商品化疫苗,已无法满足国内市场的需求。因此,有必要开展猫传染性鼻-结膜炎疫苗的研究。本实验室前期已分离5株FCV毒株,并对其致病性与免疫原性进行了比较。本研究选择具有较强致病性与良好免疫原性的FCV CH-JL2株为种毒株,进行灭活疫苗的制备及免疫效果评估。本研究首先进行了FCV CH-JL2株动物感染试验,通过滴鼻方式以0.5mL剂量分别接种6~11周龄健康未免疫中华田园猫,接种效价分别为10~8.97.97 TCID_(50)/mL、10~(7.97)TCID_(50)/mL与10~6.97.97 TCID_(50)/mL。连续观察14 d,通过对临床症状、体温、排毒情况、组织病理变化以及组织中病毒分布情况的观察与监测,评价其致病性。结果显示,不同滴度的FCV CH-JL2分离株感染猫均可发病,发病率依次为100%、50%与25%。病毒滴度为10~8.97.97 TCID_(50)/mL时,FCV感染猫5 d后开始排毒,出现体温升高、鼻眼分泌物增多、口腔溃疡等典型临床症状。但在感染猫的肺脏、心脏、脾脏、气管等全身组织脏器中均未检测到FCV。由此说明,FCV CH-JL2分离株不属于FCV VSD毒株,感染猫后仅可引起上呼吸道感染,不能造成全身感染。其次,进行病毒灭活条件的筛选和疫苗制备。确定灭活条件为:病毒液加入体积分数为0.2%甲醛,置22℃恒温摇床中(120 r/min)灭活48 h;将灭活后的FCV CH-JL2株病毒液与氢氧化铝佐剂按9:1比例混匀,制备灭活疫苗。灭活疫苗经理化性能检测、无菌检验、外源病毒检验均为合格,无任何污染,注射猫无不良反应。再次,通过皮下注射和肌肉注射两种方式对试验猫注射1mL(10~(6.5)TCID_(50)/mL)FCV灭活疫苗。以临床观察及抗体含量监测为判定标准,筛选最佳免疫途径。结果显示,两种免疫方法产生抗体含量无明显差异,但皮下注射方法出现硬结概率更低,在实际操作中更为方便可控。第三,以皮下注射方式分别给试验猫注射1mL病毒含量为10~8TCID_(50)/mL、10~7TCID_(50)/mL、10~6TCID_(50)/mL的FCV灭活疫苗,第21 d进行二次免疫。每7 d采集试验猫外周血进行血清抗体含量检测。二免后第21 d进行动物感染试验,根据临床症状与RT-PCR检测结果,统计感染情况并筛选最佳免疫剂量。结果表明,灭活疫苗病毒滴度为10~8TCID_(50)/mL时,保护率为100%(5/5),可提供较好且稳定的保护。最后,对实验室制备170601批次灭活疫苗进行单剂量及单剂量重复接种安全性试验、超剂量接种安全性试验,接种后连续14 d定点测量试验动物体温,并进行临床观察。结果表明,疫苗接种后各组试验猫体温正常,精神状态及食欲良好,全身未见不良反应。说明灭活疫苗单剂量及单剂量重复接种、超剂量接种对均猫安全。本研究成功制备了FCV CH-JL2株灭活疫苗,经理化性能检测、无菌检验、外源病毒检验及效力和安全性评价,质量合格,安全性良好,具有较强免疫原性,为疫苗的进一步研发提供数据参考。
【图文】：

病毒粒子,基因组

病毒粒子结构

基因结构,水泡,口臭

同时还会引发上呼吸道疾病，在舌侧或口腔其他位置出现水泡，水泡随即破裂形成溃疡，并伴有红肿，通常会出现口臭和流涎等症状。治疗及时，，2~3 周就能痊愈。感染强图.1.2 基因结构Fig.1.2genetic structure
【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S859.53

【参考文献】