2017-2018年中国部分地区PEDV的遗传演化分析

发布时间：2020-05-29 16:59

【摘要】：猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引发的一种高度接触性的猪肠道传染性疾病,其主要特征为腹泻、脱水和呕吐。感染可发生在所有年龄的猪群中,但临床症状有些不同,其中,以哺乳仔猪的临床症状最为严重,死亡率高。自2010年10月PED在南方大面积爆发,迅速蔓延至全国以来,对PEDV的流行情况进行持续的监测十分必要。本研究通过收集全国部分地区不同猪场的22份猪腹泻病料,采用RT-PCR方法检测病料。其中,呈现PEDV阳性的病料13份。对13份呈现PEDV阳性的病料进行核酸提取,并扩增其S基因。与CV777疫苗株S基因序列相比较,核苷酸同源性为93.8%~94.9%,推导的氨基酸序列同源性为93.1%~94.1%。进化树分析表明,13份PEDV阳性病料的S基因均属于G2亚群,且为non S-INDEL型,与北美毒株的亲缘关系较远。进一步的病原分离,将PEDV阳性病料处理后接种至Vero细胞,用含4‰胰酶的DMEM作维持液,观察病变情况。通过RT-PCR试验、电镜观察以及蚀斑纯化试验鉴定,成功分离3株PEDV毒株,分别命名为HuB-WH-2017、HLJ-JMS-2018和HLJ-2018。稳定传代至第F25,检测病毒的TCID_(50),分别为10~(5.62) TCID_(50)/mL、10~(5.6) TCID_(50)/mL和10~(6.33) TCID_(50)/mL。对3株病毒的S基因进行扩增和测序,并与CV777毒株的S基因进行氨基酸比对,结果发现,3株病毒在抗原表位上均有氨基酸点突变发生。继而,对分离到的3株病毒HuB-WH-2017、HLJ-JMS-2018和HLJ-2018分别培养,经蔗糖密度梯度离心的方法纯化病毒后,分别免疫小鼠,并监测血清中中和抗体水平的变化。免疫前小鼠体内中和抗体呈阴性,在免疫后14 d,3株病毒的中和抗体水平上升至1:478、1:489和1:502,并且随着免疫次数的增加,血清中中和抗体水平也随之提升。最终在加强免疫后第7 d,获得的血清中和效价达到1:614、1:614和1:631。以不同毒株的免疫后血清分别与3株分离株与1株疫苗株CV777进行抗原抗体中和试验,结果表明,3株新分离毒株与CV777疫苗株之间中和活性存在差异,但差异不显著。
【图文】：

1图 1-1 PEDV 基因组结构（Lee et al . 2015）Figure 1-1 The structure of PEDV genome（Lee et al. 2015）

近年中国地区PEDV的阳性检出率
【学位授予单位】：中国农业科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S852.651

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本文编号：2687225