C-型钠肽（CNP）在小鼠腔前卵泡发育中的作用研究

发布时间：2020-05-30 19:13

【摘要】：卵泡是位于卵巢皮质,由卵泡膜细胞、颗粒细胞等包裹卵母细胞形成的特殊结构,在卵母细胞正常发育过程中具有支持和保护的重要作用。根据卵泡的形态和结构特征,从原始卵泡到成熟卵泡的整个卵泡发育阶段,卵泡又可以分为腔前卵泡和有腔卵泡。此前的大量研究主要集中在有腔卵泡,并已证实发育动态主要受到促性腺激素FSH和LH的调控。然而,对于腔前卵泡发育的相关研究非常有限,目前比较明确的是其对于促性腺激素的依赖程度很低。然而,腔前卵泡发育的核心调控机制是什么,却一直没能得到回答。该研究发现,C型钠肽(C-type natriuretic peptide,CNP)具有促进腔前卵泡发育的效果。进一步的实验提示,CNP在腔前卵泡发育中,会被显著的激活。据此,本研究推测CNP在腔前卵泡发育中具有重要功能。为此,该论文在以下几方面开展了研究:(1)系统分析了在不同阶段腔前发育以及有腔卵泡中CNP及其受体NPR2的表达特征,发现CNP和NPR2均定位于腔前卵泡的颗粒细胞中,并且在腔前卵泡发育过程中不断上调。(2)利用体外培养的腔前卵泡作为模型,通过向培养液中添加不同浓度的CNP(0.1、1、10、100、500nM),我们发现在无FSH条件下,10nM以上的CNP可以以浓度依赖的方式,单独促进腔前卵泡的生长。(3)为了揭示CNP对腔前卵泡发育的促进作用,我研究了 CNP对腔前卵泡颗粒细胞增殖的影响,发现在低血清体系下,CNP可以以剂量依赖的形式,显著地促进颗粒细胞增殖,提高颗粒细胞活力。(4)我们分别利用成年(8周龄)和幼龄(13日龄)小鼠,通过腹腔注射CNP预处理后接受超排实验来研究CNP在体内条件下对卵泡发育的影响,结果显示CNP可以显著增加总排卵数和可用卵数。(5)为了探究腔前颗粒细胞中Nppc和Npr2的表达调控机制,我们研究了卵母细胞来源的生长因子对腔前颗粒细胞中CNP和NPR2的表达的影响,结果显示BMP15、GDF9等对Nppc和Npr2表达有不同程度的促进作用,并且这些因子之间表现出协同作用。(6)为了更准确的理解CNP对腔前卵泡生长影响的作用,我们研究了 CNP对腔前卵泡中与卵泡发育、雌激素代谢相关基因的表达,结果显示CNP对这些过程可能存在显著的影响。综上所述,该研究证实了 CNP体内外均可以促进小鼠腔前卵泡生长,同时证明了 CNP-NPR2信号促进颗粒细胞增殖是其调控腔前卵泡发育的重要调节机制之一;卵母细胞来源的生长因子对Nppc和Npr2的表达具有显著的影响;CNP可能会通过影响WNT信号和雌激素合成进而实现其促进腔前卵泡生长、颗粒细胞增殖的作用。这些结果不仅是对腔前卵泡发育机制的重要补充,同时也丰富了卵泡发育过程中卵母细胞和体细胞的对话机制。
【学位授予单位】：中国农业大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S814.1

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本文编号：2688587