浒苔多糖对肉仔鸡免疫及生长性能影响的研究

发布时间：2017-03-26 23:15

  本文关键词：浒苔多糖对肉仔鸡免疫及生长性能影响的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：多糖是机体的供能物质和组成材料,广泛存在于动物细胞膜和植物、微生物的细胞壁中。近年来,随着分离技术的进步、检测水平的提高,人们发现多糖及其复合物除了参与机体细胞的各种生命活动外,还具有诸如抗凝血、降血糖、抗病毒、抑肿瘤、减缓机体衰老和增强动物免疫力等一系列特异的生物活性,尤为可贵的是多糖对机体并没有毒副作用,是理想的药物来源之一,获得了人们的广泛关注。浒苔多糖(Enteromorpha polysaccharide,EP)是从浒苔中分离得到的生物活性物质,不仅具有降血脂、降血糖、抗氧化等活性,还具有较强的免疫调节作用,是药物与食品研究开发的良好原料。本研究以浒苔多糖为材料,在对其结构和生物活性进行初步研究之后,通过在饮水中添加小同剂量的EP,测定与肉仔鸡的生长及免疫相关的指标,研究了EP对肉仔鸡免疫及生长性能的影响,旨在为以浒苔为基础进一步开发新型绿色饲料添加剂提供理论依据,主要研究结果如下:结构分析及体外生物活性检测结果表明,EP具有多糖的典型结构和生物活性。其中,红外光谱分析显示EP具有多糖的典型特征性吸收峰,且富含硫酸基团;体外抗氧化能力测定表明EP具有一定的抗氧化活性,并表现为量效关系,即一定范围内,其抗氧化效果随着浓度的增加而加强;MTT试验结果显示EP能够促进鸡外周血淋巴细胞的增殖,其最大安全浓度为125ug/m L,最大增殖率为28.643%,并与植物血凝素(PHA)具有协同作用。体内试验选用1日龄AA肉鸡200只,以正常饮水作为对照,EP设低(0.5‰)、中(1.0‰)、高(2.0‰)3个剂量组进行雏鸡饮饲试验,通过免疫器官指数、肠绒毛形态、血清HI抗体滴度、黏膜抗体水平等方面研究了EP对肉仔鸡免疫性能的影响;通过平均日采食量、平均日增重和料肉比等指标研究了EP对肉仔鸡生长性能的影响,研究发现:EP能够促进肉仔鸡脾脏和法氏囊的发育,提高免疫器官指数;EP能够提高鸡群血清HI抗体效价,其中1.0‰EP组的效果最显著(P0.05);EP能够增强试验鸡的黏膜免疫反应,提高胆汁、气管洗液、十二指肠洗液中特异性SIg A抗体水平,其中1.0‰EP组的特异性SIg A抗体水平最高(P0.05);EP能够提高试验鸡平均日采食量和平均日增重,降低料肉比,对肉仔鸡的生长有明显的促进作用,其中1.0‰EP组效果最显著(P0.05);EP显著增加了试验鸡十二指肠、空肠及回肠的绒毛长度和宽度、肌肉厚度、黏膜厚度及绒腺比值,其中0.5‰和1.0‰的添加剂量效果较为显著(P0.05)。综上所述,EP具有较强的抗氧化活性和促进鸡外周血淋巴细胞增殖的能力,对肉仔鸡免疫及生长性能具有显著的增强和促进作用,1.0‰的饮水浓度为最佳添加剂量。
【关键词】：浒苔多糖 肉仔鸡 免疫性能 生长性能 抗氧化活性 细胞增殖
【学位授予单位】：山东农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S831.5
【目录】：

• 符号及缩略语4-9
• 中文摘要9-11
• ABSTRACT11-13
• 1 引言13-18
• 1.1 多糖免疫增强及促生长作用研究概况13-14
• 1.2 浒苔多糖的研究进展14-17
• 1.2.1 浒苔多糖的化学成分研究概况14-15
• 1.2.2 浒苔多糖的生物活性研究进展15-17
• 1.2.2.1 抗氧化作用15
• 1.2.2.2 免疫增强作用15-16
• 1.2.2.3 降血脂、降血糖作用16
• 1.2.2.4 抗菌、抗病毒作用16
• 1.2.2.5 生长促进作用16-17
• 1.3 本研究目的及意义17-18
• 2 材料与方法18-29
• 2.1 材料18-21
• 2.1.1 试验药物18
• 2.1.2 试验动物及饲料18
• 2.1.3 疫苗及病毒18
• 2.1.4 主要试剂及配制18-21
• 2.1.4.1 粗糖纯化所需试剂18
• 2.1.4.2 多糖含量测定所需试剂18
• 2.1.4.3 多糖抗氧化能力测定所需试剂及配制18-19
• 2.1.4.4 细胞增殖所需试剂及配制19-20
• 2.1.4.5 肠道形态结构观察所需试剂20
• 2.1.4.6 ELISA所需试剂及配制20
• 2.1.4.7 抗体效价所需材料20-21
• 2.1.5 主要仪器21
• 2.2 方法21-25
• 2.2.1 浒苔粗多糖的精制21
• 2.2.2 浒苔多糖含量的测定21-22
• 2.2.2.1 葡萄糖标准曲线的制作21-22
• 2.2.2.2 样品多糖含量的测定22
• 2.2.3 浒苔多糖的红外光谱分析22
• 2.2.4 浒苔多糖体外抗氧化能力的测定22-24
• 2.2.4.1 浒苔多糖对DPPH·清除能力的测定22
• 2.2.4.2 浒苔多糖对羟基自由基清除力的测定22-23
• 2.2.4.3 浒苔多糖对超氧阴离子自由基（O2-?）清除能力的测定23-24
• 2.2.4.4 浒苔多糖对铁离子还原能力的测定24
• 2.2.5 浒苔多糖对鸡外周血淋巴细胞最大安全浓度的测定24
• 2.2.6 外周血淋巴细胞增殖试验24-25
• 2.3 动物分组及处理25
• 2.4 样品采集方法25-26
• 2.5 生长性能指标测定26
• 2.6 免疫性能指标测定26-28
• 2.6.1 免疫器官指数测定26
• 2.6.2 肠道组织形态测定26
• 2.6.3 NDV特异性SIg A抗体水平的测定26-27
• 2.6.3.1 抗原最佳包被浓度和样品最适稀释浓度的确定26-27
• 2.6.3.2 间接ELISA程序27
• 2.6.4 血清HI抗体效价的测定27-28
• 2.7 数据统计与分析28-29
• 3 结果与分析29-49
• 3.1 浒苔多糖含量的测定29
• 3.2 浒苔多糖的红外光谱分析29
• 3.3 多糖的抗氧化活性29-32
• 3.3.1 浒苔多糖对DPPH·自由基的清除能力29-30
• 3.3.2 浒苔多糖对羟基自由基的清除能力30-31
• 3.3.3 浒苔多糖对超氧阴离子自由基（O_2~-·）的清除能力31
• 3.3.4 浒苔多糖对铁离子的还原能力31-32
• 3.4 浒苔多糖对鸡外周血淋巴细胞增殖的影响32-33
• 3.4.1 浒苔多糖最大安全浓度的确定32-33
• 3.4.2 浒苔多糖对外周血淋巴细胞增殖的影响33
• 3.4.3 浒苔多糖协同PHA刺激对外周血淋巴细胞增殖的影响33
• 3.5 浒苔多糖对肉仔鸡生长性能的影响33-36
• 3.5.1 浒苔多糖对平均日采食量的影响33-34
• 3.5.2 浒苔多糖对平均日增重的影响34-35
• 3.5.3 浒苔多糖对料肉比的影响35-36
• 3.6 浒苔多糖对肉仔鸡肠道形态结构的影响36-44
• 3.6.1 浒苔多糖对十二指肠形态结构的影响36-39
• 3.6.2 空肠形态结构变化39-41
• 3.6.3 回肠形态结构的变化41-44
• 3.7 浒苔多糖对肉仔鸡免疫器官指数的影响44-45
• 3.7.1 浒苔多糖对脾脏指数的影响44-45
• 3.7.2 浒苔多糖对法氏囊指数的影响45
• 3.8 浒苔多糖对NDV特异性SIg A抗体水平的影响45-48
• 3.8.1 间接ELISA方法最佳反应条件确定结果45-46
• 3.8.2 胆汁中NDV特异性SIg A抗体水平变化46
• 3.8.3 十二指肠洗液中NDV特异性SIg A抗体水平变化46-47
• 3.8.4 气管洗液中NDV特异性SIg A抗体水平变化47-48
• 3.9 浒苔多糖对血清HI抗体效价的影响48-49
• 4 讨论49-55
• 4.1 多糖的提取、纯化及结构鉴定49-50
• 4.1.1 多糖的提取及纯化方法49
• 4.1.2 多糖的含量测定方法49
• 4.1.3 多糖的红外光谱分析49-50
• 4.2 多糖的抗氧化能力50
• 4.3 浒苔多糖对鸡外周血淋巴细胞增殖的影响50-51
• 4.3.1 浒苔多糖对细胞生长的影响50-51
• 4.3.2 浒苔多糖对淋巴细胞增殖的影响51
• 4.4 浒苔多糖对肉仔鸡生长性能的影响51-52
• 4.5 浒苔多糖对鸡肠道发育的影响52-53
• 4.6 浒苔多糖对肉仔鸡新城疫疫苗免疫应答的影响53-55
• 4.6.1 浒苔多糖对雏鸡免疫器官发育的影响53-54
• 4.6.2 浒苔多糖对雏鸡黏膜免疫的影响54
• 4.6.3 浒苔多糖对雏鸡体液免疫的影响54-55
• 5 结论55-56
• 参考文献56-65
• 致谢65-66
• 攻读学位期间发表论文情况66

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