CLC对冻融牛精子质量参数及抗氧化、抗凋亡的影响
发布时间：2020-06-07 05:54
【摘要】：冷冻保存可以延长精子的保存时间,但是冷冻过程中会使精子的细胞和生理学结构发生一系列的变化从而受到一定程度的损害,包括精子获能的特征、精子寿命以及卵母细胞的相互作用和受精能力等。精液的冷冻保存就是利用干冰(-79℃)、液氮(-196℃)或者其它制冷的设备作为冷源,将精液经过特殊的处理之后,保存在极低的温度下,完全的抑制了精子的代谢活动,使得精子处于休眠状态,待升温后复苏,并且不失去受精的能力,从而使得精子达到了长期保存的方法。本试验的目的是探究添加包埋胆固醇的甲基-β-环糊精(CLC)对牛冷冻精子质量参数、抗氧化及抗凋亡能力的影响。试验分对照组(0mg/ml)和不同剂量 CLC 处理组(0.5mg/ml、1.0mg/ml、1.5mg/ml、2.0mg/ml),分别测定冻融后牛精子的质量参数、蛋白的酪氨酸磷酸化、抗氧化基因以及细胞凋亡基因的表达。试验结果如下所示:1.在精液稀释液中添加不同浓度的CLC处理组(0mg/ml、0.5mg/ml、1.0 mg/ml、1.5mg/ml、2.0mg/ml)。放入液氮中进行保存,保存5h以上,检测出精子的活力与质膜完整性,顶体膜的完整性均有不同程度的减弱。不同处理组之间无明显差异。2.对照组(0mg/ml)冻融后获能及处理组(0mg/ml、0.5mg/ml、1.0mg/ml、1.5 mg/ml、2.0 mg/m1)冻融后牛精子进行顶体膜蛋白分离、蛋白含量测定,并用SDS-PAGE和Western blot进行分析。结果表明:顶体蛋白在32KDa处可以看出0.5 mg/ml最接近获能处理的精子。3.对于不同处理组(0mg/ml、0.5 mg/ml、1.0mg/ml、1.5 mg/ml、2.0mg/ml)先进行总RNA的提取,随后进行反转录和RNA浓度的测定,根据引物设计和引物序列的参照表,随后进行PCR的目的基因扩增,然后进行琼脂糖凝胶电泳,最后对抗氧化基因表达量的检测结果进行分析。结果表明:在CAT、GPx、SOD基因的表达量条带上显示0.5mg/ml和1.0mg/ml均显著高于对照组(P0.05)。而在1.0mg/ml处显示表达量最高。4.对于不同处理组(0mg/ml、0.5 mg/ml、1.0mg/ml、1.5 mg/ml、2.0mg/ml)先进行总RNA的提取,随后进行反转录和RNA浓度的测定,根据引物设计和引物序列的参照表,随后进行PCR的目的基因扩增,然后进行琼脂糖凝胶电泳,最测结果进行分析。后细胞调亡基因的检结果表明:在Caspase-3、Caspase-8和BAX基因的表达量条带上显示0.5 mg/ml和1.0 mg/ml均显著低于对照组(P0.05)。在0.5mg/ml处理组处最低。
【图文】：
逦延边人Ｔ硕－Ｌ屮、Ｉｋ沦文逦逡逑１．５ｍｇ／ｍｌ、２．０ｍｇ／ｍｌＣＬＣ）的蛋白进行１＼＼＾６１１１１＇）１0１；分析，分另［］运用酉各l#酸磷逡逑酸化一抗与酶标二抗进行孵育之后，得出如图３－３－１显示，分子量大约在３２邋ＫＤａ逡逑处出现了蛋白条带，将蛋白条带进行分析，制出酪氨酸磷酸化水平的条带灰度值逡逑（如图３－３－］邋）邋，邋０．５邋ｍｇ／ｍｌ邋ＣＬＣ处理组精子蛋白的酪氨酸磷酸化水平与新鲜获能逡逑处理组的酪氨酸磷酸化水平最为相近。说明在０．５邋ｍｇ／ｍｌ邋ＣＬＣ处理组精子发生获逡逑能和“获能样”变化之后，蛋白酪氨酸磷酸化水平有一定程度上的上升。逡逑
图３－３－２．不同浓度ＣＬＣ处理组对冻融的卞精子获能处理后酪氨酸磷酸化水逡逑平的条带灰度值逡逑Ｆｉｇｕｒｅ．３－３－２邋Ｇｒａｙ邋ｖａｌｕｅ邋ｏｆ邋ｂａｎｄｉｎｇ邋ｏｆ邋ｔｙｒｏｓｉｎｅ邋ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ邋ｌｅｖｅｌ邋ａｆｔｅｒ逡逑ｆｒｅｅｚｅ－ｔｈａｗｅｄ邋ｂｏｖｉｎｅ邋ｓｐｅｒｍ邋ｃａｐａｃｉｔａｔｉｏｎ邋ｉｎ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ邋ｏｆ邋ＣＬＣ邋ｔｒｅａｔｍｅｎｔ逡逑ｇｒｏｕｐ逡逑３．邋４不同浓度的ＣＬＣ处理组对冻融牛精子抗氧化基因表达量的影逡逑响逡逑将添加了不同浓度ＣＬＣ进行冷冻保存的精子进行解冻之后，进行ＲＮＡ的逡逑提取，，然后进行ＰＣＲ扩增和ＤＮＡ电泳试验。检测精子内的抗氧化基因ＣＡＴ、逡逑ＧＰｘ、ＳＯＤ、Ｇａｐｄｈ的表达量。根据所得出的条带进行了分析之后，从而得出如逡逑下数据，从结果中可以看出在添加不Q嫶碜椋ǎ板澹恚纾恚臁ⅲ埃靛澹恚纾恚臁ⅰ剑板澹恚纾恚荨㈠义希卞澹咤澹靛澹礤澹纾礤澹荨ⅲ玻板澹礤澹纾礤澹卞澹缅澹体澹茫╁澹勘４娴木樱舛持裕椋磕诘目寡趸瘍婂义
本文编号：2700953
【图文】：
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