抗原ELISA检测试剂盒和胶体金试纸条用于禽白血病病毒检测时的比较研究

发布时间：2017-03-27 15:01

  本文关键词：抗原ELISA检测试剂盒和胶体金试纸条用于禽白血病病毒检测时的比较研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：禽白血病病毒(Avian Leukosis Virus,ALV)自1908年首次被分离并报道以来,随后的几十年里世界各地都有该病的爆发与流行,这说明禽白血病已广泛分布于世界各地,由ALV感染所引发的临床和亚临床感染,给养禽业带来了较大的经济损失,也引起了世界各地养禽业的足够重视。从上世纪70代以来,世界各大国际跨国育种公司都在鸡群中采取了一系列清除和净化ALV的措施,现如今,各发达国家的养禽业已经基本消灭和控制住了经典的外源性禽白血病病毒在规模化养鸡场的流行,但在我国鸡群中,ALV感染仍十分普遍。随着ALV的诊断鉴别方法越来越多,国内养禽业对禽白血病病毒不同鉴别方法的关注度越来越高。那么,选择灵敏度高和特异性强的检测方法无疑可以让各原种鸡场和商品代鸡场有效的防控禽白血病,还能减少不必要的损失。1.不同ELISA试剂盒和胶体金试纸条对细胞上清中P27的检测比较为比较不同禽白血病病毒(ALV)抗原ELISA检测试剂盒和胶体金试纸条的灵敏度,本研究将A、B、J三种不同ALV亚群分别以50TCID50、100TCID50、500TCID501000TCID50、10000TCID50五种剂量接种培养于对数生长期的DF-1细胞上,2h后换含2%胎牛血清的细胞维持液,接种后第2-8天每天收取细胞上清并补充等量的DMEM,每份上清用三种不同的抗原ELISA检测试剂盒(A、B、C)和两种胶体金试纸条(D、E)按照各自的说明书同时检测。结果显示,三种亚群的五种剂量分别应用A、B、C三种ELISA检测试剂盒灵敏度基本一致,但在针对三种亚群病毒接种的的个别剂量个别天数时,ELISA-B试剂盒的灵敏度要略高于A和C;两种胶体金试纸条的抗原检出时间检测结果完全一致,但其灵敏度均要比ELISA检测试剂盒的低,在接种低剂量的病毒时,胶体金试纸条的抗原检出时间要比ELISA试剂盒延后1-2天,但在接种高剂量的病毒或者到了低剂量病毒复制增殖的后期时,胶体金试纸条能够更快速的做出判定,相比试剂盒节省了不少时间。2.不同ELISA试剂盒和胶体金试纸条对蛋清中P27的检测比较在本研究中,应用卵黄囊接种对90只SPF种鸡分别接种了A、B、J三个亚群的ALV病毒,每隔4周对鸡采血做病毒分离,选择持续产生病毒血症的母鸡,待其生长至产蛋期收集种蛋,收集的蛋与鸡编号一一对应,用抗原ELISA检测试剂盒A、B和胶体金试纸条D、E对60枚种蛋蛋清进行了检测,并将检测结果与病毒分离的结果相对比,结果显示胶体金试纸条与病毒分离的吻合率不超过60%,而检测试剂盒的吻合率最高的达到了97.5%,胶体金试纸条的蛋清阳性检出率远低于ELISA试剂盒的检出率。这说明在某些应用方面,胶体金试纸条还无法完全替代ELISA检测试剂盒。本研究为广大种鸡场和养禽业开展禽白血病防控与净化选择灵敏度高操作简便的检测方法及其适用范围提供了有效借鉴。
【关键词】：禽白血病病毒 亚群 酶联免疫吸附试验 胶体金 禽白血病净化与防控
【学位授予单位】：山东农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S855.3
【目录】：

• 符号及缩略词5-10
• 中文摘要10-12
• ABSTRACT12-14
• 1 前言14-28
• 1.1 禽白血病及历史14-15
• 1.2 禽白血病病原学15-23
• 1.2.1 形态学特征15-16
• 1.2.2 病毒结构16-18
• 1.2.3 不同亚群分型18-19
• 1.2.4 理化及生长特性19
• 1.2.5 病毒的复制、转录及翻译19-21
• 1.2.6 慢性和急性致肿瘤ALV及其致肿瘤机制21-22
• 1.2.7 ALV的致病性22-23
• 1.3 禽白血病流行病学23-24
• 1.3.1 感染宿主和传播方式23
• 1.3.2 免疫反应及抗体的产生23
• 1.3.3 ALV在国内的流行情况23-24
• 1.4 禽白血病病毒的诊断与检测24-25
• 1.4.1 病毒的分离与鉴定24
• 1.4.2 斑点杂交技术24
• 1.4.3 ELISA试剂盒检测ALV24-25
• 1.4.4 胶体金试纸条检测ALV25
• 1.5 禽白血病病毒的净化与防控25-26
• 1.5.1 选择净化的种源及净化原种鸡群26
• 1.5.2 原种鸡场的核心群外源性禽白血病病毒的净化26
• 1.5.3 严格预防使用被外源性ALV污染的弱毒疫苗26
• 1.5.4 鸡舍的环境控制26
• 1.5.5 抗病毒药物的预防控制26
• 1.6 本研究的目的及意义26-28
• 2 材料与方法28-40
• 2.1 试验材料28-30
• 2.1.1 试验细胞和动物28
• 2.1.2 试验毒株28
• 2.1.3 试验主要试剂和试剂盒28-29
• 2.1.4 试验主要仪器29
• 2.1.5 液体试剂和培养基的制备29-30
• 2.2 不同试剂盒及胶体金试纸条对细胞上清中P27的检测30-37
• 2.2.1 病毒鉴定与培养30-33
• 2.2.2 三种不同的ALV亚群各毒株的培养与检测样品的收集33-34
• 2.2.3 不同商品化p27抗原ELISA检测试剂盒的检测34-36
• 2.2.4 ALV抗原胶体金检测试纸条的检测36-37
• 2.3 不同ELISA试剂盒及胶体金试纸条对蛋清中P27的检测37-40
• 2.3.1 动物实验分组及处理37
• 2.3.2 SPF鸡的病毒血症变化37-38
• 2.3.3 不同试剂盒及胶体金试纸条对蛋清中P27的检测38-40
• 3 试验结果40-51
• 3.1 病毒分子生物学鉴定40
• 3.2 病毒细胞生物学鉴定与定量40-43
• 3.2.1 A亚群SDAU09C1株的鉴定与定量40-41
• 3.2.2 B亚群SDAU09C2株的鉴定与定量41-42
• 3.2.3 J亚群NX0101株的鉴定与定量42-43
• 3.3 不同抗原ELISA检测试剂盒和胶体金试纸条对细胞上清P27抗原检测时的比较43-49
• 3.3.1 不同ELISA检测试剂盒和胶体金试纸条对ALV-A的检测结果43-45
• 3.3.2 不同ELISA检测试剂盒和胶体金试纸条对ALV-B的检测结果45-47
• 3.3.3 不同ELISA检测试剂盒和胶体金试纸条对ALV-J的检测结果47-49
• 3.4 不同抗原ELISA检测试剂盒和胶体金试纸条对蛋清P27抗原检测时的比较49-51
• 3.4.1 试验鸡只的选择49-50
• 3.4.2 不同检测试剂盒和胶体金试纸条对蛋清ALV抗原的检测结果50-51
• 4 讨论51-55
• 5 结论55-56
• 参考文献56-64
• 致谢64-65
• 攻读学位期间发表论文情况65

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本文编号：270550