水貂阿留申病ELISA抗体检测试剂盒的研制及水貂阿留申病血清学调查

发布时间：2017-03-28 16:14

  本文关键词：水貂阿留申病ELISA抗体检测试剂盒的研制及水貂阿留申病血清学调查，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：水貂阿留申病(Aleutian disease of mink,MAD)是慢性、消耗性传染病。是由水貂阿留申病毒[1](Aleutian mink disease parvovirus,AMDV)引起,该病毒具有自主复制能力,能使水貂的免疫细胞遭到侵害从而导致全身免疫系统功能紊乱。该病几乎遍布于世界各养貂国家,在我国某些貂群中血清阳性率可达50%~90%,各个年龄段水貂都易感,该病已成为水貂的重要传染病之一。目前我国使用的水貂阿留申病鉴定方法主是CIEP(Convection immunoelectrophoresis:对流免疫电泳),该方法检测成本较高,每次检测样品的数量也比较少,不方便进行大批量检测,并且多用于实验室检测。因此研发更高效、低廉的检测试剂盒,对貂场的净化以及该病的防控具有重要意义。本研究将反应原性和特异性鉴定良好的人工设计抗原肽段(命名为sd)在大肠杆菌BL21中诱导表达,经Niz+亲和层析柱纯化后再超滤浓缩,得到高纯度、反应原性好的sd重组蛋白,浓度为12 mg/ml。按照实验室已经建立的水貂阿留申病ELISA抗体检测方法,将此sd重组蛋白为包被抗原,组装了水貂阿留申病ELISA抗体检测试剂盒,并进行了试剂盒保存期、可重复性、特异性以及敏感性的评价。结果表明:试剂盒在-20℃条件下保存期为6个月,4℃条件下保存期为1个月。试剂盒能特异性的检测水貂阿留申病阳性标准血清,与犬瘟热病毒、水貂肠炎病毒、犬细小病毒、伪狂犬病毒等阳性标准血清均无交叉反应;用该试剂盒对水貂阿留申病标准阳性血清进行检测并于CIEP法作比较,结果表明灵敏度高于CIEP方法;重复性试验表明,试剂盒批内差异系数为0.667%~5.811%,批间差异为0.882%~6.046%,小于10%,说明试剂盒批间、批内可重复性好。用研制的ELISA试剂盒与CIEP检测方法同时检测实验室所保存的379份水貂血清。结果显示sd-ELISA试剂盒检测方法检出阳性率是:82.3%,而CIEP阳性检出率为是:74.6%。用该方法对我国山东、大连、吉林、黑龙江、河南等主要养貂区域的2190份血清进行阿留申病血清学调查,各地感染率存在明显差异,分别为:96.3%、82.1%、71.2%、64.2%、69.8%。实验结果表明sd-ELISA试剂盒具有可重复性好,特异性强、灵敏度高等特点,其检测效果与CIEP相比,价格低廉,可批量操作,能够满足我国水貂场、散养户以及进出口检验检疫的实际需要。
【关键词】：水貂阿留申病病毒 ELISA试剂盒 抗体检测 血清学调查
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S858.92
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文缩略词表10-11
• 前言11-13
• 第一篇 文献综述13-27
• 第一章 水貂阿留申病的研究进展13-22
• 1.1 MAD的流行历史及流行态势14-16
• 1.2 MAD的流行病学16-19
• 1.3 MADV的概述19-22
• 第二章 水貂阿留申病的诊断方法22-27
• 2.1 对流免疫电泳（CIEP）22-23
• 2.2 血清电泳23
• 2.3 碘凝集试验（IAT）23-24
• 2.4 淋巴细胞酯酶标记24
• 2.5 间接免疫荧光实验（IIF）24
• 2.6 PPA-ELISA24
• 2.7 抗原检测法24-25
• 2.8 补体结合试验（CF）25
• 2.9 聚合酶链式反应（PCR）25-26
• 2.10 酶标斑点纸条26
• 2.11 火箭电泳26
• 2.12 免疫复合物（CIC）检测26-27
• 第二篇 研究内容27-65
• 第一章 水貂阿留申病ELISA抗体检测试剂盒的研制27-55
• 1.1 实验材料28-33
• 1.2 主要实验仪器及设备33
• 1.3 方法33-42
• 1.4 结果42-52
• 1.5 讨论52-54
• 1.6 小结54-55
• 第二章 水貂阿留申病血清学调查55-65
• 2.1 材料56
• 2.2 方法56-58
• 2.3 结果与分析58-62
• 2.4 讨论62-64
• 2.5 小结64-65
• 结论65-66
• 参考文献66-73
• 导师简介73-74
• 作者简介74-75
• 致谢75

【参考文献】

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本文编号：272601