一株H3N2猪流感病毒的进化分析及对小鼠的致病性研究

发布时间：2020-06-22 17:41

【摘要】：猪流感(Swine influenza,SI)是由猪流感病毒(Swine influenza virus,SIV)引起的人畜共患传染病,其临床综合征主要是呼吸道症状。引起猪流感的病原为猪流感病毒,属于正黏病毒科,甲型流感病毒属成员。猪流感病毒可按照病毒粒子表面对红细胞有凝集性的血凝素和能将吸附在细胞表面的病毒粒子解脱下来的神经氨酸酶糖蛋白进行分类,共有16个H亚型和9个N亚型。根据HA和NA的不同,又可以将其分为很多血清亚型,目前主要存在的是H1N1、H1N2、H3N2三种猪流感亚型。猪、禽和人流感病毒通过HA蛋白上的凝集素位点都可以跟猪上皮细胞上的含唾液酸的糖蛋白受体结合。流感病毒基因在猪的身上发生重新的组合而产生新的病毒株,进而流感病毒易于感染人类细胞,这种后果是很严重的,对人生命健康造成严重危害,对于该病的预防和治疗也带来很大挑战,因此具有重要的公共卫生学意义。亚洲、欧洲、欧洲等的许多国家和地区都发生过该病,对养猪行业造成了巨大的损失。因此开展猪流感病毒的调查研究,进而了解猪流感病毒在我国的基因进化和致病性非常重要。为探究SIV在山东省猪群中流行情况及毒株的基本特性,本实验室在2016年从山东省部分地区采集鼻拭子样品接种10日龄SPF鸡胚进行病毒的分离,经过血凝试验,RT-PCR扩增NP或M基因,阳性即确定为猪流感病毒,接着用分型引物进行病毒亚型的鉴定,判定为H3N2亚型,命名为A/Swine/Shandong/JN1/2016(H3N2)。运用RT-PCR扩增猪流感基因的8个片段,进行全基因组测序及序列分析,发现PA,NS和M基因来自于2009年H1N1大流行的流感病毒(pdm/09 H1N1)分支PB2,HA和NA来自于北美三重排流感病毒,NP基因来自欧洲类禽型流感病毒,PB1来自类人型流感病毒。为深层次了解病毒的特性,我们选用BALB/c小鼠为试验动物,以10~6EID_(50)/只感染剂量滴鼻感染6周龄雌性BALB/c小鼠,观察小鼠的活动,死亡的情况,记录小鼠的体重变化,采集小鼠脏器进行病毒滴度测定,观察小鼠内脏的组织病理学变化,对该毒株特性进行分析。结果显示,小鼠活动性下降,采食量减少,体重下降。脏器的滴定结果,在肺脏和鼻甲中能够检测到病毒复制,而在肾脏、脾脏和脑中均未检测到病毒。肺脏中的病毒含量为2.25log_(10)EID50/mL,鼻甲中的病毒含量为1.75log_(10)EID50/mL。为了解山东省猪群中SIV的感染情况,采用HI抗体检测方法,对764份血清进行检测。这对阐明猪流感病毒特性提供了进一步的理论和实验方面的参考依据。
【学位授予单位】：山东农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S852.651
【图文】：

体重变化,感染后,小鼠,鼻甲骨

图 9 感染后小鼠的体重变化Fig.9 Body weight changes after infection in mice3.14 小鼠脏器中病毒含量的滴定结果用 106EID50/50 μl 剂量H3N2亚型猪流感病毒经过鼻腔感染小鼠后于第3天采集鼠脏器进行病毒滴定，滴定结果显示，小鼠感染病毒 3 天后，病毒仅在肺脏和鼻甲骨中分离到含量较低的病毒，在脑、脾和肾脏中均未检测到病毒复制。在肺脏中，病毒制滴度在 2.25log10EID50/ml。在鼻甲骨，病毒复制滴度 1.75log10EID50/ml。

脏器,小鼠,病毒复制,肺脏

图 9 感染后小鼠的体重变化Fig.9 Body weight changes after infection in mice3.14 小鼠脏器中病毒含量的滴定结果用 106EID50/50 μl 剂量H3N2亚型猪流感病毒经过鼻腔感染小鼠后于第3天采鼠脏器进行病毒滴定，滴定结果显示，小鼠感染病毒 3 天后，病毒仅在肺脏和鼻甲中分离到含量较低的病毒，在脑、脾和肾脏中均未检测到病毒复制。在肺脏中，病制滴度在 2.25log10EID50/ml。在鼻甲骨，病毒复制滴度 1.75log10EID50/ml。

【参考文献】