泰拉霉素完全抗原的合成和鉴定

发布时间：2020-07-03 02:04

【摘要】：利用丁二酸酐法对泰拉霉素的羟基衍生化,引入游离羧基,合成泰拉霉素半抗原。采用活泼酯法将泰拉霉素半抗原分别与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清白蛋白(OVA)偶联,合成人工完全抗原泰拉霉素-BSA和泰拉霉素-OVA。利用LC-MS鉴定衍生化后半抗原的合成,利用荧光光谱、考马斯亮法鉴定完全抗原的合成。用泰拉霉素-BSA免疫小鼠,采用间接ELISA法测定小鼠抗血清效价。泰拉霉素半抗原和BSA的偶联比为17∶1。三免后小鼠抗血清效价可达1∶8 000。
【图文】：

研究论文食品与生物技术学报2017年第36卷第1期朱欣凤，等：泰拉霉素完全抗原的合成和鉴定偶联率[12]。图3泰拉霉素半抗原合成的质谱分析结果Fig.3LC-MS/MSresultofTulathromycinhapten图4BSA及泰拉霉素-BSA偶联物的荧光光谱Fig.4FluorescencespectrometryofBSAandBSA-TulathromycinA=（εbN/M）C，其中A为吸光度值，εb为摩尔吸光系数，N为每个BSA自由氨基酸数目，C为蛋白浓度，M为BSA或BSA-泰拉霉素的相对分子质量。得ABSA=（εbNBSA/MBSA）CBSAABSA-AT=（εbNBSA-T/MBSA-T）CBSA-TKBSA=ABSA/CBSA=εbNBSA/MBSAKBSA-T=ABSA-T/CBSA-T=εbNBSA-T/MBSA-T其中，K为直线斜率KBSAKBSA-T=NBSA/MBSA（NBSA-X）/（MBSA+XMT）根据文献报道NBSA=60，MBSA=66430，MT=806.08，经实验测得KBSA=0.0073，KBSA-T=0.0056，由此得出泰拉霉素与BSA的偶联比约为17∶1。2.4抗体效价的测定采用间接ELISA测定小鼠血清效价。三免后以1μg／mL包被抗原包板，3号小鼠血清效价最高，达到1∶8000，测定结果见表1，1号和5号小鼠血清效价为1∶4000，2号小鼠血清效价为1∶2000。其中3号小鼠抗血清的IC50为98.5μg/L。实验结果充分说明了人工抗原泰拉霉素-BSA和泰拉霉素-OVA的合成是成功的。表13号小鼠抗血清效价测定结果Table1Titrationofthethirdmouse’santiserum相对分子质量低于1000的小分子物质通常不具有免疫原性，进入生物体内后并不能诱导抗体的产生，这样的小分子必须与载体蛋白偶联形成完全抗原后才具有免疫原性[13-14]。考察泰拉霉素结构后决定通过泰拉霉素的羟基与丁二酸酐

研究论文食品与生物技术学报2017年第36卷第1期朱欣凤，等：泰拉霉素完全抗原的合成和鉴定偶联率[12]。图3泰拉霉素半抗原合成的质谱分析结果Fig.3LC-MS/MSresultofTulathromycinhapten图4BSA及泰拉霉素-BSA偶联物的荧光光谱Fig.4FluorescencespectrometryofBSAandBSA-TulathromycinA=（εbN/M）C，其中A为吸光度值，εb为摩尔吸光系数，N为每个BSA自由氨基酸数目，C为蛋白浓度，M为BSA或BSA-泰拉霉素的相对分子质量。得ABSA=（εbNBSA/MBSA）CBSAABSA-AT=（εbNBSA-T/MBSA-T）CBSA-TKBSA=ABSA/CBSA=εbNBSA/MBSAKBSA-T=ABSA-T/CBSA-T=εbNBSA-T/MBSA-T其中，K为直线斜率KBSAKBSA-T=NBSA/MBSA（NBSA-X）/（MBSA+XMT）根据文献报道NBSA=60，MBSA=66430，MT=806.08，经实验测得KBSA=0.0073，KBSA-T=0.0056，由此得出泰拉霉素与BSA的偶联比约为17∶1。2.4抗体效价的测定采用间接ELISA测定小鼠血清效价。三免后以1μg／mL包被抗原包板，3号小鼠血清效价最高，达到1∶8000，测定结果见表1，1号和5号小鼠血清效价为1∶4000，2号小鼠血清效价为1∶2000。其中3号小鼠抗血清的IC50为98.5μg/L。实验结果充分说明了人工抗原泰拉霉素-BSA和泰拉霉素-OVA的合成是成功的。表13号小鼠抗血清效价测定结果Table1Titrationofthethirdmouse’santiserum相对分子质量低于1000的小分子物质通常不具有免疫原性，进入生物体内后并不能诱导抗体的产生，这样的小分子必须与载体蛋白偶联形成完全抗原后才具有免疫原性[13-14]。考察泰拉霉素结构后决定通过泰拉霉素的羟基与丁二酸酐

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