FGF21对于非酒精性脂肪肝小鼠的保护作用

发布时间：2020-07-03 08:36

【摘要】：非酒精性脂肪肝是目前在人类和动物机体中较为高发的疾病,但是在临床中并未找到好的治疗方法,故前期的预防是防止肝脏发展为非酒精性脂肪肝的有效手段。成纤维细胞生长因子21(FGF21)是一种参与脂质利用的新型代谢调节因子,可参与并调控脂质的调节代谢。为明确FGF21对于非酒精性脂肪肝的保护作用,本试验分别从体内和体外两方面进行了探究。试验一在体内探究外源性注射FGF21对高脂饮食饲料(HFD)诱导的小鼠非酒精性脂肪肝的干预作用,分析FGF21对免疫应答指标和血液学参数的影响。在实验中,共选择24只雌性小鼠,使用HFD随机饲喂12只小鼠,其它12只小鼠饲喂正常日粮。30天后,将两种饲喂方式的小鼠再平均分为四组:1组HFD组;2组对照组;3组HFD+FGF21组;4组对照+FGF21组。分别于注射后第三天和第六天将小鼠处死,分离肝脏并制做切片。采集血液并通过流式细胞术分析CD3和CD19的水平;分离血清,通过ELISA检测IL-4、IL-6和TNF-α水平;通过半自动生化分析检测TG,TC,NEFA,LDL-c和HDL-c水平。结果显示HFD+FGF21组中CD3和CD19水平显著降低(P0.01)。外源性FGF21注射HFD+FGF21组中IL-4,IL-6,TNF-α,TC,TG,LDL-c和NEFA水平显著低于HFD组(P0.05)。试验二通过体外实验探究FGF21的缺乏对于非酒精性脂肪肝的影响。使用小鼠AML12细胞进行试验,并用siRNA沉默FGF21基因,腺病毒过表达LKB1基因,首先将细胞培养12 h,然后加入沉默和过表达试剂,继续培养48 h,之后饥饿12 h,再加入1.2 mol/L的NEFA继续培养12 h,收细胞待检。通过激光共聚焦荧光技术评估肝细胞脂滴的变化;通过流式细胞术测定细胞内活性氧(ROS)的含量;通过ELISA检测细胞内FGF21,sirt1,IL-4,IL-6,TNF-α;使用生化分析测定GLU,TG,PA;通过WB的检测AMPK,p-AMPK;通过q-PCR检测FGF21,LKB1,SREBP-1c,IL-8,TNF-α。结果显示沉默FGF21可显著降低肝细胞中LKB1对AMPK磷酸化水平的影响(P0.05)。通过诱导过表达LKB1和沉默FGF21降低了p-AMPK/AMPK的速率和下游SREBP-1c的表达(P0.05)。NEFA处理的LKB1过表达细胞的GLU水平显著高于添加NEFA细胞(P0.05),NEFA处理的FGF21沉默细胞中的GLU水平高于NEFA处理的细胞(P0.05),但没有显著变化,在NEFA处理下,两者同时处理时GLU高于NEFA处理下过表达LKB1细胞的表达量。由NEFA处理的FGF21沉默的细胞中IL-6和TNF-α水平显著高于在NEFA细胞中的IL-6和TNF-α水平(P0.05)。当FGF21沉默时,ROS的表达增加。沉默FGF21导致脂滴增加,LKB1过表达似乎对脂滴没有影响。综上所述,外源性FGF21对于轻度非酒精性脂肪肝小鼠具有保护作用,主要表现在对能量,免疫指标以及对炎症指标的下调。又通过体外实验结果表明在FGF21缺乏时,游离脂肪酸升高导致肝细胞氧化应激程度增加,能量、脂质代谢异常和炎症的增加。综上所述,FGF21在保护非酒精性脂肪肝方面有很好的应用前景,为以后摄入高能量状态下FGF21防止肝脏发展为非酒精性脂肪肝提供了理论基础和实验依据。
【学位授予单位】：黑龙江八一农垦大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S856.4;R575.5
【图文】：

病理学变化,肝脏脂肪变性,肝脏细胞,生化指标

显示肝脏细胞大小正常，核圆和细胞质无异常，整齐排列并位于细胞中央（图2-1b）。对照+FGF21 组的脂肪变性程度与对照相比没有显著差异。基于 NAFLD 结果诊断金标准，即组织学分析，表明在 HFD 小鼠摄食能显著的造成肝脏脂肪变性和肝脏损伤。这些发现表明外源性注射 FGF21 对 HFD 诱导的脂肪变性具有保护作用。图 2-1 在 FGF21 注射第六天时小鼠肝脏病理学变化注：以上均是在 400×下观察到的结果。Figure 2-1 Pathological changes of liver in mice on the sixth day of FGF21 injectionNote: All of the above are the results observed at 400×.2.2.2 细胞因子和生化指标的变化接下来，我们研究了 FGF21 对肝脏炎症的抑制作用。各组中 IL-4，IL-6 和 TNF-α的变化如图 2-2 所示。在注射 FGF21 的第 3 天和第 6 天，HFD 组 IL-6、IL-4、TNF-α水平显著高于 HFD+FGF21 组(P <0.01，图 2-2A，B，C)。IL-4、IL-6、TNF-α在对照组与对照+FGF21组间无显著性差异(P >0.05)。HFDHFD+FGF21FGF21

图 2-2.在 FGF21 注射的第 3 天和第 6 天 IL-4，IL-6，TNF-α的变化L-6 在第三天和第六天的表达量；（B）IL-4 在第三天和第六天的表达量；（C）TNF-α在第六天的表达量。*”和“**”表示与 HFD 组比较差异显著和极显著（P <0.05，P <0.01）。Figure 2-2 Changes of IL-4,IL-6,TNF-α on the third day and sixth day day after FGF21 injectionTNTN

【相似文献】