miR-145靶向FSCN1调控奶牛金葡菌型乳腺炎的分子功能初步探讨

发布时间：2020-07-03 13:49

【摘要】：随着人们生活水平的日益提高,牛奶早已成为一种非常重要的营养食品,而人们对牛奶品质的要求也越来越高。奶牛乳腺炎则是限制牛奶品质的一个重要的瓶颈。奶牛乳腺炎通常指的是由于病原微生物的感染而使奶牛乳腺组织产生的炎症的统称。乳腺炎的发生会导致奶牛产奶量和乳品质的显著下降,给奶牛养殖业造成严重的经济损失。本研究采用对金黄色葡萄球菌攻毒乳腺组织及攻PBS组织进行miRNA表达谱及转录组测序,筛选出其表达下调的miRNA和表达上调的目的基因,验证候选miRNA与免疫基因的靶向关系及其在乳腺上皮细胞系中的相关功能。1miR-145在牛乳腺上皮细胞系(Mac-T)中的功能研究为探究miR-145在Mac-T中的功能,我们在Mac-T中过表达和干扰miR-145,并检测其过表达和干扰效果。效果显著后应用Elisa和EdU检测Mac-T几种细胞因子的分泌水平变化及细胞增殖能力变化。结果显示:miR-145在牛乳腺上皮细胞系中过表达情况下可以显著降低白细胞介素12的分泌量和肿瘤坏死因子α的分泌量,显著增加干扰素γ的分泌量。与此同时,过表达miR-145后牛乳腺上皮细胞的增殖能力被抑制。2 miR-145靶基因的预测及靶基因FSCN1的识别由金黄色葡萄球菌攻毒的乳腺组织转录组数据结果,结合TargetScan、miRanda以及PicTar三个microRNA靶基因预测软件预测出数个候选靶基因。并通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白质免疫印迹检测(Western Blot)和双荧光素酶报告基因系统(Luciferase)多重验证筛选出miR-145的靶基因。结果显示:miR-145过表达或抑制表达后,FSCN1的mRNA表达均发生显著变化,并且miR-145过表达可以引起FSCN1蛋白表达的显著下调。FSCN1基因mRNA3'UTR存在确实的miR-145的靶向结合位点,并且下调FSCN1的活性。故miR-145可靶向调控FSCN1。3 FSCN1在Mac-T细胞中的功能研究采用RNA干扰法来对Mac-T细胞系中FSCN1的表达进行干扰,荧光定量PCR技术验证设计的siRNA敲降效果显著后,用Elisa检测Mac-T细胞系细胞因子的分泌情况以及EdU增殖实验检测细胞增殖状况。从而阐明FSCN1对Mac-T细胞系这两项功能的影响。结果显示:FSCN1的敲降可以使白细胞介素12的分泌量发生显著上调,而肿瘤坏死因子α的分泌量却显著下调。4全文结论金黄色葡萄球菌感染的乳腺组织,机体开启自我防护产生炎症,Bta-miR-145表达下调,从而释放了其对FSCN1基因的干扰作用,FSCN1表达上调促进乳腺上皮细胞增殖力图恢复细菌侵袭后损坏的乳腺细胞组织。
【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S858.23
【图文】：

扬州大学硕士学位论文构并含有成熟ｍｉＲＮＡ，结构具有３’端多聚腺苷酸化和５’端帽，在ＲＮａｓｅｌｌｌ酶Ｄｏｒｓｈａ作用下，与ＤＧＣＲ８结合形成蛋此蛋白复合物剪切为约７０ｎｔ的小片段ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ。并在转运质中，与Ｄｉｃｅｒ酶结合蛋白将ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ切割成长度约为２２速在细胞质中解螺旋，其中一条链为成熟的ｍｉＲＮＡ，另一解［４７，４８］具体过程参考图１－１。逡逑

绪欣邋ｍｉＲ－１４５靶向尸篇／调控奶牛金葡菌型乳腺炎的分子功能初步探讨ｐ长的小ＲＮＡ［５４，５５１。ＲＮＡ沉默中ｍｉＲＮＡ作为一个介导分子。针对大部白，ｍｉＲＮＡ几乎涉及到动物所有的发育及病理过程。ＭｉＲＮＡ的生物起源的控制的，它的异常调节通常和一些人类癌症有关［５６—５８］。它通过ＲＮＡ编，尿苷化和腺苷酰化，ＲＮＡ降解作用来对其本身进行修饰『５＿。对于ｍｉＲ正常途径包括那些不依赖Ｄｒｏｓｈａ和Ｄｉｃｅｒ的途径。逡逑ＲＮＡ沉默中，ｍｉＲＮＡ是通过与目标基因的碱基配对发挥功能，然而ＡＧＯ通过诱导翻译，ｍＲＮＡ脱腺苷化和ｍＲＮＡ降解来完成［６１＆。ｍｉＲＮＡ结合ｍＲＮＡｓ的３’非编码区，在ｍｉＲＮＡ的５＇末端几个个碱基是重要的识别位种子序列”（图１－２）。ｍｉＲＮＡ下游核苷酸都可以与靶基因配对［６３，６４１。超过６０码基因至少存在一个保守的ｍｉＲＮＡ结合位点，考虑到有几个不保守的结，大部分蛋白编码基因可能受几个ｍｉＲＮＡ共同调控逡逑

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本文编号：2739740