死亡鸭胚中金黄色葡萄球菌的分离鉴定及耐药性与毒力基因检测

发布时间：2020-07-09 16:35

【摘要】：金黄色葡萄球菌作为一种常见细菌广泛分布于自然界中,随着耐甲氧西林金黄色葡萄球菌等耐药菌株的出现,及其临床感染人的情况不断被报道,使得对金黄色葡萄球菌的研究成为近年来的热点。金黄色葡萄球菌能够感染人和动物并造成严重危害,因此对家畜家禽中携带的金黄色葡萄球菌的研究具有重要的公共卫生意义。自2016年以来,本实验室检测到山东省多地规模化鸭胚孵化场的鸭胚死亡率和弱雏率显著升高,而细菌感染是鸭胚在孵化过程中死亡的主要原因;本研究通过对从死亡鸭胚中分离的金黄色葡萄球菌的耐药基因检测和药敏试验,初步掌握山东地区鸭胚源金黄色葡萄球菌的耐药特点,为生产养殖中种鸭的合理用药提供理论依据;通过对鸭源金黄色葡萄球菌携带的毒力基因的检测分析,以推测鸭胚源金黄色葡萄球菌的致病性,初步了解种鸭源金黄色葡萄球菌的毒力特点。本研究对2016年-2017年来自山东省临沂、泰安、菏泽三地市的鸭胚孵化场的无破损死亡鸭胚10个批次共计302枚进行了细菌的分离培养、革兰氏染色镜检、16Sr DNA和金黄色葡萄球菌nuc基因的PCR鉴定,共从224枚死鸭胚中分得细菌263株,分属20个种,死鸭胚细菌感染率74.2%。在分离所得的细菌中,大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的分离率列前三位,分别占29.66%(78/263),28.14%(74/263)和12.17%(32/263)。对分离获得的32株鸭胚源金黄色葡萄球菌采用K-B法进行了16种常见抗生素的耐药性检测。结果显示,32株金黄色葡萄球菌对16种常见抗生素表现出不同程度的耐药:对四环素和克林霉素耐药率最高为78.13%,对环丙沙星、磺胺类、克拉霉素的耐药性都在60%以上;对头孢噻吩、氨苄西林、多粘菌素B和万古霉素敏感(62.5%-100%)。统计表明本试验分离的鸭胚源金黄色葡萄球菌都呈现多重耐药的特点。通过此项研究调查,我们在治疗和预防山东地区种鸭场金黄色葡萄球菌感染时可以优先考虑头孢类、氨苄西林等抗菌药物,同时建议临床治疗时交替使用抗菌药物或通过药敏试验制定用药方案,科学、合理地使用抗菌药物。对分离获得的32株金黄色葡萄球菌进行大环内酯类耐药基因的PCR检测,结果表明msr A和erm C耐药基因在本试验的鸭胚源金黄色葡萄球菌中携带率较为普遍。其中msr A的检出率为40.62%,erm C的检出率为53.13%,这两种耐药基因的二重携带率为25%。对分离获得的32株金黄色葡萄球菌进行4种毒力基因的PCR检测。结果表明,hla、hlb、clfa和pvl的检出率分别是81.25%、71.88%、78.13%和6.25%。其中27株菌株(84.38%)同时携带2种及以上毒力基因:仅携带二种毒力基因的细菌检出率为21.9%,携带三种毒力基因的菌株检出率为59.4%,有1株金黄色葡萄球菌被检测为携带四种毒力基因。这表明山东地区的鸭胚中金黄色葡萄球菌分离株大部分携带有多种毒力基因,可能会导致金黄色葡萄球菌具有较强毒力,使其具有较高的致病性。通过以上四部分的研究,可以认为所收集的鸭胚死亡的原因之一是细菌感染,其中所分离得到的金黄色葡萄球菌具有较高的耐药性,并携带有大量耐药基因和毒力基因,可能会导致其具有较高的致病性,给养殖业带来潜在风险。
【学位授予单位】：山东农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S852.611
【图文】：

菌落形态,普通琼脂,金黄色葡萄球菌,菌落形态

3 结果3.1 死亡鸭胚中细菌的分离鉴定结果3.1.1 金黄色葡萄球菌培养特性及革兰氏染色结果在普通 LB 琼脂培养基上形成光滑、湿润、隆起的边缘整齐、不透明、直径 1～2 mm略有黄色色素的圆形菌落；在血平板形成圆形凸起、有光泽、金黄色，菌落周围出现全透明溶血圈的菌落（图 1）；在 10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤内混浊生长。初步认定金黄色葡萄球菌的菌落特征。将普通琼脂培养基 37 ℃培养 12 h 后将培养基上分离到隆起的圆形的单个菌落，接种到 LB 培养基中摇菌培养 8 h 后，进行革兰氏染色，镜观察。金黄色葡萄球菌革兰氏染色呈阳性，普通光学显微镜下用油镜观察呈典型球菌状聚集在一起如葡萄状（图 2）。

形态图,革兰氏染色,金黄色葡萄球菌,形态

图 2 金黄色葡萄球菌革兰氏染色形态（1000×）Fig. 2 Morphology of Staphylococcus aureus（1000×）萄球菌 BP 培养基培养特性arker 培养基上形成圆形、光滑、凸起、湿润、直径为 2缘为淡色，周围为一混浊带并在其外层有一透明带的菌

菌落形态,金黄色葡萄球菌,培养基,菌落形态

图 2 金黄色葡萄球菌革兰氏染色形态（1000×）ig. 2 Morphology of Staphylococcus aureus（1000×菌 BP 培养基培养特性r 培养基上形成圆形、光滑、凸起、湿润、直径为为淡色，周围为一混浊带并在其外层有一透明带的

【参考文献】