煎盘梭菌和淀粉水平对獭兔生产性能及盲肠菌群的影响

发布时间：2020-07-11 05:36

【摘要】：畜牧生产上,微生物添加剂具有调节宿主肠道微生态平衡和提高动物对饲料消化利用效率的作用。家兔为单胃草食动物,其消化特点与猪、禽类和反刍动物有一定差异,因此在这些动物上使用的益生菌在家兔上并不完全适用,而针对家兔研究开发的微生物制剂种类较少。煎盘梭菌(Clostridium sartagoforme)具有分解纤维、淀粉、几丁质等多种碳水化合物的作用;该菌能够产生芽孢,相比于乳酸菌和双歧杆菌具有更好的抗逆性;作为厌氧菌,煎盘梭菌在适应消化道厌氧环境方面具有一定的优势;而目前关于煎盘梭菌应用在动物上的研究还未见报道。另外,家兔生产上关于日粮中淀粉具体需要量没有明确规定。基于这些原因,本试验从伊拉肉兔粪便中分离鉴定了煎盘梭菌XN-T4,并研究了煎盘梭菌和淀粉水平对獭兔生产性能、免疫特性、肠道发育、盲肠内环境和盲肠菌群的影响,从而为家兔微生物添加剂的研究开发提供资料依据,并进一步补充完善家兔营养需要和饲养标准。本试验研究结果如下:1利用梭菌增殖培养基(RCM),通过厌氧培养,结合16S rDNA分子鉴定技术,从伊拉肉兔粪便中分离得到煎盘梭菌XN-T4,该菌株为革兰氏阳性厌氧菌,能够产生芽孢,具有较好的胃酸和胆盐耐受性,并且能够耐受80℃的高温10 min。2随机选取162只35日龄断奶獭兔进行二因素三水平的饲养试验,将试验獭兔分成AG、AZ、AD、BG、BZ、BD、CG、CZ、CD共9组:字母A、B、C表示基于獭兔平均体重的菌剂添加量,分别是10~8 CFU/kg、10~6 CFU/kg和仅添加培养基的空白对照;G、Z、D分别表示淀粉水平为24.4%、18.6%、12.7%的日粮。每组3个重复,每个重复6只獭兔。预饲期7 d,正饲期28 d,期间测定獭兔体增重和每个重复总的耗料量;最后5 d采用全收粪法,每个重复选取1只獭兔收集粪便,并单独测定其采食量。饲养试验结束后每个重复选取1只,共27只獭兔进行屠宰取样,测定其营养物质消化率、免疫器官指数、血清免疫指标和肠绒毛高度,并对其盲肠pH、氨态氮浓度和菌群结构进行检测。结果表明:(1)A、B、C三种处理条件下,獭兔腹泻率和死亡率无显著差异(P0.05);平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)和屠宰率有随着菌的添加量增加而降低的趋势,而料重比(F/G)有升高的趋势(P0.05);粗蛋白(CP)、中性洗涤纤维(NDF)、酸性洗涤纤维(ADF)的消化率有上升趋势(P0.05);肝脏指数有随菌的添加量增加而降低的趋势(P0.05)。(2)采食不同淀粉含量日粮的獭兔腹泻率有随淀粉含量上增加而上升的趋势(P0.05);采食18.6%淀粉水平日粮的獭兔ADFI、屠宰率和对于CP的消化率最高(P0.05),而F/G比最低(P0.05);采食12.7%淀粉含量日粮的獭兔回肠绒毛高度低于其他两组(P0.05)。(3)以上测定指标在添加煎盘梭菌和饲喂不同淀粉水平日粮处理条件下无互作效应。3通过对饲养试验部分的獭兔盲肠内容物pH、氨态氮和菌群结构进行检测,结果显示:(1)A、B、C三种处理条件下獭兔盲肠内容物pH和氨态氮浓度差异均不显著(P0.05),但随着菌剂添加量的增加,拟杆菌门(Bacteroidetes)相对丰度提高,而厚壁菌门(Firmicutes)相对丰度降低;纲水平上,拟杆菌纲(Bacteroidia)相对丰度升高而梭菌纲(Clostridia)相对丰度降低。(2)G、Z、D三种日粮水平条件下,试验兔盲肠内容物pH差异不显著(P0.05);氨态氮浓度有随日粮淀粉含量降低而升高的趋势(P0.05);在菌群结构上,采食18.6%淀粉水平日粮的獭兔盲肠疣微菌门(Verrucomicrobia)的Akkermansia属相对丰度最高。综上,添加煎盘梭菌不能提高獭兔对于淀粉的消化率;相比于24.4%和12.7%淀粉含量的日粮,18.6%淀粉水平的日粮饲喂条件下獭兔生产性能最佳。
【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S829.1
【图文】：

直链淀粉,分子化学,结构示意图,淀粉

图 1-1 直链淀粉与直链淀粉分子化学结构示意图Fig 1-1 The molecular structure of amylose and amylopectin starch.2 淀粉的分类食物中的淀粉首先被唾液中的 α-淀粉酶水解，然后在小肠被胰 α-淀粉酶水解成麦、麦芽三糖和其他支链寡糖，这类物质也被称为 α-极限糊精，它们通过麦芽糖酶淀粉酶(MGAM)和蔗糖酶-异麦芽糖酶(SI)的作用进一步转化为葡萄糖(Lee B et13)。根据机体对淀粉的消化速度不同，淀粉被分为快速消化淀粉(Rapidly Digestarch，SDS)、慢速消化淀粉(Slowly Digestible Starch，SDS)和抗性淀粉(Resistant St)。快速消化淀粉，指在口腔和小肠中能被迅速消化吸收的那部分淀粉，这部分淀粉迅速分解为葡萄糖以提高血糖供应能量，消化所需时间少于 20 min。慢速消化淀粉在小肠能被完全吸收，但是所需时间大约在 20 min～120 min，能续释放葡萄糖，维持餐后血糖稳定，有效防止胰岛素抵抗现象的出现(Englyst HN e92)。抗性淀粉，欧洲联合行动(EURESTA)经过讨论分析，将食物中不能被小肠消化吸

电泳图,梭菌,电泳图

煎盘梭菌XN-T4 16S rDctrophoresis of C. sartag测序长度为 1432bpGCTGACCCTACCTTATTGCCAACTCTCACCGCGACATTCTCAGCCTACAATCCGCATCTTTTTGTACTATGATTTGACGTCATGCTCAACTTAATCCCAACATCTCACCCGAAGGGACTTTTCTTCGCGTTGCTCAATTCCTTTGAGTTTTGCGGCGGCAC

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AGGTTGCCCACGTGTTACTCACCCGTCCGCCGCTAGGTTCATCCCCGAAGGGAATCTCCTCGCTCGACTGCATGGTAGCACGCGCC在 Genebank 数据库中将所得序列进行 BLAST 后，只有 Clostridium sartagoforme与 XN-T4 与同源性最高，16Sr DNA 序列 Query cover 为 100%，Identities 达到 99%，见图 2-2。选择同源性较高的几个菌株，做系统进化树，结果见图 2-3。因此可以认为 XN-T4即为煎盘梭菌(Clostridium sartagoforme)。

【参考文献】