金龟子绿僵菌对绵羊痒螨（兔亚种）的致病力及致病机制初探

发布时间：2020-07-11 22:59

【摘要】：痒螨病是我国养兔业中的常见外寄生虫病,其感染率约11.11%~70.00%。该病是由绵羊痒螨(兔亚种)(Psoroptes ovis var.cuniculi)寄生于兔的外耳道皮肤表面,以形成卷纸样痂皮为主要临床特征,可导致患兔消瘦,降低肉品质,甚至引起死亡,严重影响了养兔业的发展。随着杀螨化学药物耐药性的不断出现和人们对绿色食品需求的增加,需要寻求新的、绿色有效的痒螨病防控方法。金龟子绿僵菌(Metarhizium anislpliae)是一种广泛用于防治农林害虫的生物杀虫剂,已有研究证实其对痒螨具有离体致病能力,但是否对痒螨病具有临床治疗效果,及其对痒螨的致病机理尚不明确。因此本研究从离体和在体试验评价了金龟子绿僵菌对绵羊痒螨(兔亚种)的致病力,同时进一步探讨其致病机制。主要研究结果如下:1金龟子绿僵菌对绵羊痒螨(兔亚种)的致病力研究为研究金龟子绿僵菌对痒螨是否具有致病能力。采用4种不同浓度(6.14×107、6.14×108、6.14×109、6.14×1010个孢子/m L)的金龟子绿僵菌悬浮液对活性较好的绵羊痒螨(兔亚种)进行离体杀螨观察;以离体试验中筛选出的最佳杀螨浓度(109个孢子/m L)喷涂痒螨病患兔,同时以伊维菌素皮下注射组和无菌水喷涂组分别为阳性和阴性对照,治疗后定期记录各组的治疗效果。结果发现,金龟子绿僵菌对绵羊痒螨(兔亚种)有较高的离体杀虫活性,且离体杀虫效率与真菌悬浮液的浓度和作用时间成正相关性;在金龟子绿僵菌作用的第9d,109、1010个孢子/m L浓度组的螨虫致死率分别是93.33%和100.00%。临床治疗试验发现,金龟子绿僵菌对兔痒螨病具有良好的临床治疗效果,治疗后21d所有患兔全部治愈,治疗效果与伊维菌素组相当。结果表明,金龟子绿僵菌对绵羊痒螨兔亚种具有较高的致病力。2金龟子绿僵菌对绵羊痒螨(兔亚种)杀虫机理的初步探究为了探究金龟子绿僵菌对绵羊痒螨(兔亚种)的杀虫机理,本试验测定了经金龟子绿僵菌(109个孢子/m L)处理1~7d的绵羊痒螨(兔亚种)谷光氨肽-s-转移酶(GSTs)、超氧化物歧化酶(SOD)氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)的m RNA转录水平及酶活性的变化。结果表明,金龟子绿僵菌组的GSTs、SOD、CAT m RNA转录水平和蛋白水平的总体呈现先上升后降低的变化趋势,而POD总体变化与对照组差异不大。综合4种酶m RNA转录水平和酶活性的变化过程,说明金龟子绿僵菌的侵染对绵羊痒螨(兔亚种)产生毒害作用,且随着金龟子绿僵菌侵染时间的增长,酶的合成逐渐受到抑制,虫体趋向死亡。且金龟子绿僵菌对GSTs和SOD影响较大,GSTs和SOD在对抗金龟子绿僵菌时所起作用更为重要;其对POD和CAT影响较小,POD和CAT在对抗金龟子绿僵菌侵染时起到的作用较小。
【学位授予单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S858.26
【图文】：

6.14×1010个孢子/mL 浓度组，半数致死时间（LT50）为 4.26d～6.39d，且与无菌水白对照组相比，均具有极显著差异性(P<0.01)（图 2）。伊维菌素阳性对照组显示出好的离体杀虫活性，在作用的 12h 内螨虫死亡率即可将达到 100％。经金龟子绿僵菌侵染的绵羊痒螨（兔亚种）均活动能力变弱，螯肢成舒展状，抽搐状态，虫体在显微镜下观察内部成溶解透明状态，最终走向死亡。伊维菌素作于绵羊痒螨（兔亚种）后，虫体螯肢成卷曲状，发生抽搐，最终趋向死亡。

图 2 不同浓度金龟子绿僵菌孢子悬浮液对绵羊痒螨（兔亚种）的半数致死时间（平均值±）Fig. 2 LT50 of Metarhizium anisopliae spore suspensions (sporemL) against Psoroptesovis var. cuniculi (mean ± SE)注：*表示极显著，P< 0.01。Note: * : P< 0.01.5.2 金龟子绿僵菌对痒螨病患兔具有较好的临床治疗效果临床治疗结果表明，金龟子绿僵菌对兔痒螨病具有较好的治疗效果，用药后 21d供试痒螨病患兔治愈率为100%，且在60d内不复发。金龟子绿僵菌组在治疗的第3d，兔耳道内虽然仍有少量痂皮，但是已检测不到螨虫和虫卵，治疗效果达到 100％(图 3A3; 表 4)；且在治疗的第 21d，所有试验兔均被治愈，在治疗期间未观察到试验兔有炎症反应（图 3 A5; 表 3）。伊维菌素组在治疗的第 7d，试验兔的临床症状有明显的改善(图 3 B3; 表 3)；且在治疗的第 14d，兔耳道内虽然仍有少量痂皮，但是已检测不到螨虫和虫卵，治疗效果达到 100％；在治疗的第 21d，所有的试验兔均被治愈；在

试验兔耳道内的痂皮有复发的趋势，第 30d 的治疗效果是-1.87％。无菌水空白对照组，在第 3d，试验兔的左耳、右耳临床症状与恢复评分分别为 1.63±0.24 和 3.13±0.13；在第 7d，左耳、右耳的临床症状与恢复评分分别为 1.13±0.13 和 3.38±0.24(图 3 C3 和C4；表 3)；第 21d 时左耳、右耳的临床症状与恢复评分分别为 3.25±0.14 和 4.50±0.20，第 30d 的左耳、右耳的临床症状与恢复评分分别为 3.88±0.14 和 4.63±0.24(图 3 C5；C6)。在试验期间，供试患兔无任何不良反应。

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本文编号：2751049