广西牛羊AKAV感染传播媒介调查、病毒分离鉴定与致病性初步研究

发布时间：2020-07-19 10:50

【摘要】：赤羽病又名阿卡斑病(Akabane disease,AKAD),是由阿卡斑病毒(Akabanevirus,AKAV)引起的一种虫媒传染病,其主要侵害牛、羊等反刍动物,临床表现以流产、早产、死产和胎儿的先天性关节弯曲—积水性无脑综合征(AH综合征)为主,也有一些毒株可引起新生动物的非化脓性脑脊髓炎。赤羽病广泛分布于非洲、亚洲及大洋洲,通过嗜血媒介昆虫进行传播。本研究对采集自广西共2411份牛和山羊血清样品(其中山羊血清1428份,采集自12个市;牛血清983份,采集自13个市)使用ELISA方法进行AKAV抗体检测。结果表明,广西14个地市的牛和山羊群中均存在AKAV感染,各地感染情况不一,且牛的阳性率显著高于山羊,牛群总阳性率为63.89%,山羊总阳性率36.48%。通过对各地区AKAV抗体阳性率进行比较发现山羊的AKAV抗体阳性率以梧州市最高,为62.50%;牛的AKAV抗体阳性率以南宁最高,为82.29%。分析导致AKAV抗体阳性动物分布的环境影响因素时发现,广西牛和山羊AKAV的感染受到地理位置(纬度)和气候因素(温度,降雨量)的影响。本研究在广西大化县丹丈屯和板外屯以及兴业县蒲塘镇龙旗村设立的三个监控点中进行传播媒介调查,共发现五种库蠓,分别为Culicoides oxystoma(尖嗓库蠓)、Culicoidesperegrinus(异域库螓)、Culicoides arakawae(荒川库蠓)、Culicoides humeralis(肩宏库蠓)和Culicoides homotomus(原野库蠓)。其中异域库蠓和尖嗓库蠓占比较大,为优势种属。本研究在大化丹丈监控点山羊血液中分离到一株AKAV,命名为GXDH01,这是我国首株山羊源AKAV。通过分段扩增的方法获得GXDH01株的全基因序列,其中L节段全长6968bp,M节段全长4309bp,S节段全长856bp。基因序列遗传进化分析表明,该病毒与分离自牛的日本和韩国病毒株亲缘关系较近,属于亚洲群。但L节段与M、S节段分别属于不同的大分支,有发生基因重组的可能。通过开展GXDH01株对乳鼠,成年小鼠和竹鼠的致病性研究时发现,GXDH01株通过脑内接种可使乳鼠死亡,LD50为104.6TCID50;但不能使成年小鼠出现症状,该试验结果与AKAV标准株OBE-1攻毒试验结果相同。将GXDH01株通过皮下接种的方式攻毒50日龄幼年竹鼠,可使竹鼠出现神经症状并死亡。接种剂量为106.9TCID50时,死亡率为66.7%;接种量为105.9TCID50,死亡率为33.3%。死亡竹鼠剖检可见脑组织和肺脏出血,肝脏出现坏死。病理检测可见脑组织血管周围有单层或多层细胞浸润,形成“血管套”;肝组织内见数个坏死灶,灶内肝细胞变性、坏死,大量炎性细胞浸润、坏死,血管周围大量炎性细胞浸润;肺支气管及肺泡腔内大量中性粒细胞,局部肺组织内出血,肺泡隔增厚。
【学位授予单位】：广西大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S855.3
【图文】：

ＡＫＡＶ［３９】；邋２００３年，Ｈｕａｎｇ邋Ｃ等在台湾无症状的猪身上分离出一株ＡＫＡＶ，并通逡逑过ＡＫＡＶ抗体检测发现，台湾的猪群中有很高的ＡＫＡＶ阳性率［４气逡逑综合上述报道，绘制ＡＫＡＶ世界分布图（图１－１）。由图可知，ＡＫＡＶ主要的逡逑流行区域为亚洲、非洲的部分国家以及澳大利亚。逡逑１邋ｔ逡逑？邋漙逡逑ｗ逡逑图１－１邋ＡＫＡＶ的世界分布逡逑Ｆｉｇ．邋１－１邋Ｗｏｒｌｄ邋ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ＡＫＡＶ逡逑黑色表示该地区有ＡＫＡＶ病毒分离和ＡＫＡＶ抗体；红色表示该地区仅存在ＡＫＡＶ抗体逡逑Ｂｌａｃｋ邋ｉｎｄｉｃａｔｅｓ邋ＡＫＡＶ邋ｖｉｒｕｓ邋ｉｓｏｌａｔｉｏｎ邋ａｎｄ邋ＡＫＡＶ邋ａｎｔｉｂｏｄｙ邋ｉｎ邋ｔｈｅ邋ｒｅｇｉｏｎ．Ｒｅｄ邋ｉｎｄｉｃａｔｅｓ邋ｔｈｅ逡逑ｐｒｅｓｅｎｃｅ邋ｏｆ邋ＡＫＡＶ邋ａｎｔｉｂｏｄｙ邋ａｌｏｎｅ邋ｉｎ邋ｔｈｉｓ邋ｒｅｇｉｏｎ逡逑４逡逑

Ｆｉｇｕｒｅ邋１－２邋Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ邋ｄｉａｇｒａｍ邋ｏｆ邋Ｓ，邋Ｍ邋ａｎｄ邋Ｌ邋ｏｆ邋ＡＫＡＶ邋ｇｅｎｏｍｅ逡逑Ｌ节段的ＯＲＦ编码唯一产物Ｌ蛋白。在其５＇和３＇端的ＮＣＲ分别长３０ｎｔ和逡逑８２ｎｔ，锅柄状结构长２２ｂｐ。如图１－２所示：除３＿端９和１９位的２个残基外，其余逡逑２０个残基均可按照“沃森一克里克”法则进行配对。逡逑Ｍ节段的ＯＲＦ编码高甘露糖型ＧＰ前体（ＧＰＣ），该ＧＰ前体可被宿主细胞蛋逡逑白酶切割成三个部分，分别为Ｇ２蛋白，ＮＳｍ蛋白和Ｇ１蛋白。其３＇－ＮＣＲ和５＇－ＮＣＲ逡逑分别长８１ｎｔ和２２ｎｔ，锅柄状结构序列长２２ｂｐ。如图１－２所示：除３＋端８？９位的２逡逑个残基外，其余２０个残基均可配对［６５］。逡逑Ｓ节段的０ＲＦ有两个，且高度重叠，分别编码Ｎ和ＮＳｓ两个蛋白，编码ＮＳｓ逡逑蛋白的ＯＲＦ在Ｎ蛋白的内部。Ｓ节段的锅柄状结构与Ｌ和Ｍ节段有所不同，根逡逑据报道，其３＇－ＮＣＲ和５＇－ＮＣＲ的长度分别为１２３ｎｔ和３３ｎｔ，锅柄状结构序列长２４ｂｐ，逡逑如图１－２所示

逦Ｌ逡逑５邋ＡＧＵＡＧＵＧＵＧＣＣＣＣＵＡＡＡＵＧＣＡＡ逡逑图１－２ＡＫＡＶ基因组Ｓ、Ｍ和Ｌ示意图逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１－２邋Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ邋ｄｉａｇｒａｍ邋ｏｆ邋Ｓ，邋Ｍ邋ａｎｄ邋Ｌ邋ｏｆ邋ＡＫＡＶ邋ｇｅｎｏｍｅ逡逑Ｌ节段的ＯＲＦ编码唯一产物Ｌ蛋白。在其５＇和３＇端的ＮＣＲ分别长３０ｎｔ和逡逑８２ｎｔ，锅柄状结构长２２ｂｐ。如图１－２所示：除３＿端９和１９位的２个残基外，其余逡逑２０个残基均可按照“沃森一克里克”法则进行配对。逡逑Ｍ节段的ＯＲＦ编码高甘露糖型ＧＰ前体（ＧＰＣ），该ＧＰ前体可被宿主细胞蛋逡逑白酶切割成三个部分，分别为Ｇ２蛋白，ＮＳｍ蛋白和Ｇ１蛋白。其３＇－ＮＣＲ和５＇－ＮＣＲ逡逑分别长８１ｎｔ和２２ｎｔ，锅柄状结构序列长２２ｂｐ。如图１－２所示：除３＋端８？９位的２逡逑个残基外，其余２０个残基均可配对［６５］。逡逑Ｓ节段的０ＲＦ有两个，且高度重叠，分别编码Ｎ和ＮＳｓ两个蛋白，编码ＮＳｓ逡逑蛋白的ＯＲＦ在Ｎ蛋白的内部。Ｓ节段的锅柄状结构与Ｌ和Ｍ节段有所不同

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本文编号：2762319