新疆南疆牛乳头瘤病毒1型SY-12株全基因序列分析及蛋白表达研究

发布时间：2020-08-08 19:07

【摘要】：牛乳头瘤病是由牛乳头瘤病毒(Bovine papillomavirus,BPV)引起的一种肿瘤性疾病。患牛主要表现为患病处有突出体表外的赘生瘤体,且极易通过畜群间的接触引发交叉感染。已知的牛乳头瘤病毒Ⅰ型和Ⅱ型可以通过畜群混饲造成跨种间传播,主要表现为马属动物感染牛乳头状瘤病毒。因乳头瘤病毒的宿主特异性、组织局限性,以及细胞培养增殖病毒困难,目前倾向于分子水平的研究。本研究基于新疆南疆一例疑似感染牛乳头状瘤病例的样本基因分型鉴定,对牛乳头状瘤病毒1型SY-12株全长基因组序列测序及结构特征分析,并构建SY-12株L1基因的原核表达系统和E6真核表达系统,为进一步研究牛乳头瘤的基因分型、疫源追溯、病毒分子遗传演化规律、疫苗研究等提供理论依据。1.在临床诊断、病理组织学检查基础上,采用乳头瘤病毒通用引物MY11/MY09成功扩增出L1基因部分片段并测序,核苷酸同源性比较分析确定该患病动物为BPV-1型牛乳头瘤病毒感染。2.设计特异性扩增引物、测序引物,完成牛乳头瘤病毒1型SY-12全基因组序列测定。确定SY-12基因序列全长7946 bp,具有BPV的功能基因结构,包括早期编码区基因E6、E7、E1、E2、E4、E5和晚期编码区基因L1和L2,为Delta属牛乳头瘤病毒。3.以L1基因的特异性引物扩增出1488 bp目的片段,并构建BPV-1 L1基因的原核表达系统pET32a-L1,经诱导条件优化后获得分子量大小为75 KD的目的融合蛋白,与预期蛋白大小相符。4.以E6基因特异性引物,成功克隆BPV-1 E6基因,目的基因大小为414 bp,构建E6真核表达系统pEGFP-N1-E6并转染至BHK-21细胞内,倒置荧光显微镜下可见明显绿色荧光。
【学位授予单位】：塔里木大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S852.65

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本文编号：2785990