miR-142和miR-144靶向FoxO1基因调节绵羊前体脂肪细胞分化的研究

发布时间：2020-08-13 02:21

【摘要】：旨在预测并验证调节FoxO1基因表达的关键miRNAs及其调节脂肪分化的机制。本研究利用4个在线软件预测与FoxO1基因具有潜在靶标关系的miRNAs。用双荧光素酶报告系统检测荧光活性。用荧光定量PCR、Western blotting和油红O染色,分别在mRNA和蛋白水平上检测miRNA对FoxO1表达的影响以及对绵羊前体脂肪细胞分化的调节作用。结果表明,miR-142和miR-144与FoxO1具有靶标关系。过表达miR-142和miR-144显著抑制了双荧光素酶报告载体的荧光活性,下调了FoxO1mRNA(P0.01)及其编码蛋白的表达(P0.05)。miR-142和miR-144均可促进绵羊前体脂肪细胞分化,加快脂滴形成。由此证明,miR-142和miR-144靶向负调节FoxO1的表达,进而通过FoxO1对PPARγ的负调节促进绵羊前体脂肪细胞的分化。
【图文】：

Ⅲ，ＵＳＡ）进行方差分析。各表达量的柱形图用Ｇｒａｐｈ－ＰａｄＰｒｉｓｍ５．０（ＧｒａｐｈＰａｄＳｏｆｔｗａｒｅＩｎｃ，ＳａｎＤｉｅ－ｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）绘制。２结果２．１预测的与ＦｏｘＯ１具有靶标关系的ｍｉＲＮＡｓ用ＴａｒｇｅｔＳｃａｎ、ＰＩＴＡ、ＳｔａｒＢａｓｅ和ｍｉＲａｎｄａ在线软件，预测出与ＦｏｘＯ１具有靶标关系的ｍｉＲＮＡｓ分别有１５、７０、４８和４２个。用Ｖｅｎｎｙ２．１．０取交集，结果如图１所示。可见，４个软件共同预测出６个ｍｉＲＮＡｓ，分别为ｍｉＲ－１８３、ｍｉＲ－９６、ｍｉＲ－１４４、ｍｉＲ－１５３、ｍｉＲ－３７４、ｍｉＲ－１４２。经ＰｕｂＭｅｄ数据库检索，发现ｍｉＲ－９６、ｍｉＲ－１８３、ｍｉＲ－１５３和ｍｉＲ－３７４这４个ｍｉＲＮＡｓ与ＦｏｘＯ１的靶标关系已得到验证。于是，本研究以ｍｉＲ－１４２和ｍｉＲ－１４４为研究对象。ｍｉＲ－１４２种子区序列（２～７）碱基与ＦｏｘＯ１－３′ＵＴＲ第２５２４～２５２９个碱基完全互补。ｍｉＲ－１４４种子区序列（２～８）碱基与ＦｏｘＯ１－３′ＵＴＲ第２６７９～２６８５个碱基完全互补。在ＴａｒｇｅｔＳｃａｎ中，ｍｉＲ－１４２的综合排序高于ｍｉＲ－１４４。这些结果一方面在理论上说明ｍｉＲ－１４２和ｍｉＲ－１４４与ＦｏｘＯ１具有靶标关系，另一方面也说明，二者在ＦｏｘＯ１－３′ＵＴＲ上的结合位点很近。２．２验证的与ＦｏｘＯ１具有靶标关系的

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本文编号：2791375