甘青乌头生物碱的提

发布时间：2020-08-14 19:21

【摘要】：甘青乌头为毛茛科乌头属植物唐古特乌头Aconitum tanguticum(Maxim.)Stapf的干燥全草,为高山珍稀药材,性凉味苦,具有清热解毒,生肌燥湿的功效,其主要药效成分为生物碱、苷类、挥发油等,其中生物碱具有广泛的药理活性。采用90%乙醇对甘青乌头进行提取,得率为17.65%,并用不同极性有机溶剂进行萃取分离,用药效学技术方法观察测定甘青乌头醇提物(EE)、石油醚萃取部分(PE)、乙酸乙酯萃取部分(EA)、氯仿萃取部分(CH)、正丁醇萃取部分(BU)和水溶性部分(WA)对非特异性急、慢性炎症反应的影响,测定EE、PE、EA、CH、BU和WA对冰醋酸致小鼠扭体反应和热刺激痛阈的影响,比较分析其抗炎镇痛作用;研究发现甘青乌头具有一定的抗炎镇痛作用,醇提物具有较强的抗炎镇痛活性,初步筛选发现氯仿萃取部位是抗炎镇痛的主要药效物质群,其他部位亦具有一定的抗炎镇痛活性,相对较弱。根据甘青乌头抗炎镇痛作用的药效物质主要集中在醇提物的氯仿萃取部位,并且发现含有生物碱,于是对甘青乌头的总生物碱(TAA)进行提取,并对TAA进行定性定量分析和质量评价结果显示含生物碱(以乌头碱计)为0.3323%,建立了比较稳定的TAA含量测定方法,并采用Box-Behnken Design设计实验方案,以总生物碱和酯型生物碱含量为指标,在单因素试验基础上,优选TAA的提取工艺,获得最佳工艺条件为提取温度85℃,提取时间1.5h,乙醇质量分数90%,液料比15:1,该工艺条件下TAA和酯型生物碱含量分别为0.5360g/100g提取物和0.5030μg/mg总碱,且重现性好,可作为TAA提取的新工艺。选择两种给药途径研究TAA对小鼠灌胃和腹腔注射时的急性毒性,并测定LD50,初步评价其安全性,研究发现TAA灌胃给药的LD50为0.7456g/kg,TAA腹腔注射给药的LD50为0.3358g/kg,研究证实TAA经灌胃和腹腔注射对小鼠均具有一定的急性毒性,初步判断TAA急性中毒的靶器官为植物神经系统和运动神经系统,中毒较快,持续时间较短。进一步药效学研究发现TAA对非特异性急性炎症反应和慢性炎症性组织增生具有明显抑制作用,也具有一定的镇痛作用。采用脂多糖(LPS)诱导建立大鼠急性肺损伤(ALI)模型,研究TAA对ALI模型大鼠的治疗作用及作用机制,结果表明TAA通过其抗炎活性保护肺功能,且无显著的肺组织细胞毒性,TAA对LPS诱导的ALI的保护作用是通过改善肺组织病理变化,抑制NF-кB活化,减少炎性细胞浸润、血管渗出等实现的,结果显示抑制前炎症转录因子NF-кB以及炎症介质TNF-α、IL-6和IL-1β是主要的作用机制,初步表明TAA可作为急性肺损伤的有效治疗物质。采用甲氨蝶呤诱导建立大鼠急性出血性肠炎(AHE)模型,研究TAA对AHE模型大鼠的治疗作用及作用机制,研究发现TAA灌胃后能明显改善AHE模型大鼠的一般状况,改善组织形态,降低血清TNF-α和NO含量,上调回肠组织匀浆DAO、ICAM-1和MPO水平,表明TAA可有效保护肠黏膜的机械屏障,具有良好的抗炎作用,初步表明TAA可作为急性肠炎的有效治疗物质。选择常见致病菌金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠杆菌(Escherichia coli)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa),粪肠球菌(Enterococcus faecalis)和白色念珠菌(Candida albicans)为研究对象进行抗菌试验,研究发现TAA对G+菌及G-菌抗菌活性较强,而对真菌在1.0~10.0mg/m L范围内未发现明显的抑制作用,TAA对金黄色葡萄球菌的抗菌效价最高,对大肠杆菌的效价最低。体外抗炎研究结果显示,TAA可抑制LPS刺激的小鼠腹腔巨噬细胞释放NO和IL-1,有效减轻炎症损伤,TAA在60-240mg/L范围内亦能明显增强巨噬细胞的吞噬功能,结果进一步证明TAA有较强的抗炎作用。
【学位授予单位】：中国农业科学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S853.7

【参考文献】