高脂对小鼠肝脏基因RNA甲基化的影响

发布时间：2020-08-15 20:31

【摘要】：为了满足人们对动物性蛋白质的高需求,提高猪的瘦肉率、降低皮下脂肪积累成为生产者的重要任务;同时,为了保证肉品质,又需要在肌肉中沉积适当的脂肪。脂肪代谢在其中发挥了关键的作用。在分子水平上研究脂肪代谢的基因表达调控可以为解决以上问题提供理论基础。肝脏是脂肪代谢的重要场所,肝脏脂肪代谢相关基因表达调控的紊乱可导致诸如脂肪沉积、高血糖等病变,诱发非酒精性脂肪肝等严重疾病。m6A甲基化可对基因表达产生重要影响。研究表明m6A甲基化与脂肪代谢调控密切相关,而小鼠高脂营养诱导的脂肪肝的m6A甲基化修饰图谱尚未有研究报道。另外,m6A甲基化可介导RNA的翻译调控,有证据表明,翻译调控占整个基因表达调控幅度的一半以上。故本研究使用小鼠肝脏作为模型,利用MeRIP-seq和RNC-seq,探究高脂营养条件对小鼠肝脏的m6A甲基化模式和正在翻译的mRNA的影响,试图找出与肝脏脂肪代谢调控相关的重要靶点。结果显示,相比于对照组,高脂组的小鼠肝脏显示出了 m6A甲基化模式的改变,甲基化差异基因在脂质代谢、翻译等相关重要生物学过程中显著富集。差异表达的RNC-mRNA在昼夜节律、脂质代谢等重要生物学过程中显著富集。这些甲基化差异基因和差异表达的RNC-mRNA编码基因可作为候选基因,为下一步的研究奠定基础。
【学位授予单位】：广西大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S816;Q75
【图文】：

抗体,转录组,位点,生物信息学分析

接着与ｍ６Ａ抗体进行解育，ｍ６Ａ抗体便在ｍＲＮＡ上的ｍ６Ａ位点与ｍＲＮＡ结合逡逑在了一起，然后将含有ｍ６Ａ位点的ｍＲＮＡ富集出来，构建ｃＤＮＡ文库，最后进行高通逡逑量测序。其原理简图如图１－１［３１】所示。经过与参考基因组比对等相关生物信息学分析，逡逑最后可以得到全转录组水平的ｍ６Ａ修饰图谱。不过这种方法只能达到１００邋ｍ左右的分逡逑辨率，无法达到单碱基分辨率的要求，即无法检测出单个碱基上的ｍ６Ａ的具体位置。逡逑３逡逑

核糖体,操作步骤,测序,过程

序称为ＲＮＣ－ｓｅｑ，由于与核糖体足迹测序（ｒｉｂｏｓｏｍｅ邋ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ，Ｒｉｂｏ－ｓｅｑ）相比，可以测逡逑到全长的正在翻译的ｍＲＮＡ，所以又叫全长翻译组测序。ＲＮＣ－ｓｅｑ与ＲＮＡ－ｓｅｑ相比，逡逑操作步骤只是多了一步提取ＲＮＣ－ｍＲＮＡ的过程，如图１－２［９９］所示。逡逑８逡逑

高脂,血糖浓度,小鼠,对照组

３．邋１高脂饲养对小鼠血糖浓度和肝脏甘油三酯水平的影响逡逑经过８周的饲养，对照组和高脂组小鼠的血糖浓度呈现出显著的差异（ｐ＜邋０．０５），逡逑高脂组相比对照组血糖浓度上升约１．５倍（见图３－１），表明高脂饲喂对小鼠血糖代谢逡逑具有显著的影响。对小鼠肝脏冰冻切片的油红０染色结果显示，高脂组小鼠肝脏细胞积逡逑累了大量脂肪（见图３－２邋Ａ）。对肝脏甘油三酯含量的测定显示，高脂组小鼠肝脏甘油三酯逡逑水平相比对照组提升约４倍（见图３－２邋Ｂ），说明肝脏脂肪大量沉积。逡逑２．0ｉ逡逑Ｓ逦＊逡逑ｉｉｌｉｌ逡逑ＣＫ逦ＨＦＤ逡逑图３－１喂养８周后对照组和高脂组小鼠的相对血糖浓度逡逑注：ＣＫ，对照组；ＨＦＤ，高脂组。＊表示ｐ＜０．０５。逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋３－１邋Ｒｅｌａｔｉｖｅ邋ｂｌｏｏｄ邋ｇｌｕｃｏｓｅ邋ｌｅｖｅｌｓ邋ｉｎ邋ｍｉｃｅ邋ａｆｔｅｒ邋８邋ｗｅｅｋｓ邋ｏｆ邋ｆｅｅｄｉｎｇ邋ｏｆ邋ｎｏｒｍａｌ邋ｃｈｏｗ邋ｏｒ邋ａｎ邋ＨＦＤ逡逑Ｎｏｔｅ：邋ＣＫ，邋ｃｏｎｔｒｏｌ邋ｇｒｏｕｐ；邋ＨＦＤ，邋ｈｉｇｈ－ｆａｔ邋ｄｉｅｔ邋ｇｒｏｕｐ．邋＊ｐ邋＜邋０．０５．逡逑１９逡逑

【参考文献】